儿童急性淋巴细胞白血病tel基因微卫星不稳定性检测的临床意义论文

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1、儿童急性淋巴细胞白血病TEL基因微卫星不稳定性检测的临床意义论文管洪在王海燕乔宏吴春梅【关键词】白血病,.freelphoblasticleukemia（ALL）inchildren.MethodsMSIandLOHin53childrenatopathiesandfivenormalchildrenultiplex-PCRamplificationatfourmicrosatelliteslinkedtoTELgeneonchromosome12，gelelectrophoresisandargentinedye.ResultsLOHin

2、23cases（23/53），thefrequencyofLOHonfourmicrosatellites（D12s89，D12s98，D12s269，D12s358）ongthosemicrosatellites，theexpressionratioofLOHonD12s89etime，LOHandMSIicobservedinthethreestages（preliminary，remission，relapse）in18casesofallthepatients，thefre-quencyofLOHinthethreestagesin

3、arystage，butLOHultaneouslyinthreelociintherelapsestage.LOHatopathiesandfivehealthychildren.ConclusionTELgeneisrelatedtotheoccurrenceanddevelopmentofchildhoodALL.ThedetectionofMSIcanbeusedinthediagnosis，differentialdiagnosis，andpredictionoftheprognosisofthedisease，inimalres

4、idualleukemia.［KEYDS）和某些恶性淋巴瘤中均受累的所谓“杂合”基因，它的特点在于多种染色体易位都可导致TEL重排，而不同的TEL基因重排可通过不同的机制参与白血病的发生［2］。TEL基因的重排或突变常表3期管洪在，王海燕，乔宏，等.儿童急性淋巴细胞白血病TEL基因微卫星不稳定性检测的临床意义195现为微卫星不稳定性（MSI）和杂合性缺失（LOH），其在儿童白血病发病机制中的作用已引起人们的重视。本研究选取12p13TEL基因附近4个微卫星位点进行MSI和LOH的研究，以进一步探讨TEL基因微卫星的改变与儿童急性淋巴细胞白血

5、病（ALL）的发生、发展的关系。1资料和方法1.1研究对象病例组为2003年10月～2005年8月间青岛大学医学院3所附属医院儿内血液科53例初发儿童ALL，男30例，女23例;年龄3～13岁，平均6岁;53例中45例为B-ALL，8例为混合型T-BALL。病例对照组为15例良性血液病病儿，男10例，女5例;年龄5～12岁，平均8岁;其中缺铁性贫血（IDA）10例，巨幼细胞贫血（MA）2例，原发性血小板减少性紫癜（ITP）3例。以上所有病例均符合《血液病诊断和治疗标准》［3］。随机收集5例健康儿童作为正常对照。每例病儿提取骨髓细胞DNA进行

6、检测，同时检测口腔黏膜细胞DNA作自身正常对照，并对儿童ALL中18例进行了初诊、缓解和复发期的动态检测。1.2实验方法1.2.1标本采集病例组采集白血病病儿新鲜骨髓涂片2～3张，或新鲜抗凝骨髓液0.5mL，置-20℃保存备用;同时用消毒竹签刮取病儿口腔黏膜，作为自身对照，放入盛有0.5mL无菌生理盐水的EP管中，-20℃保存备用。病例对照组标本收集同病例组;正常对照组采集外周静脉血和口腔黏膜。1.2.2标本DNA的提取骨髓和外周血标本DNA提取采用常规酚抽提法。将收集的口腔黏膜标本低温5000r/min离心10min，弃上清，将沉淀物用生

7、理盐水洗涤2次，低温5000r/min离心10min，弃上清液，加入TE消化液（含100mg/L的蛋白酶K和1g/L的Tin，低温5000r/min离心20min，取上清，用紫外线分光光度计检测提取的DNA的浓度，-20℃保存备用。1.2.3位点选择及引物合成选择TEL基因附近连锁的4个微卫星位点D12s89、D12s98、D12s358、D12s269，从GenomeDataBase（.gdb.org）查出其引物序列，由上海生工公司合成。1.2.4多重PCR扩增以同一基因连锁的2个微卫星序列引物（D12s89和D12s98，D12s269

8、和D12s358）进行多重PCR扩增，25μL反应体系中含有模板DNA0.25ng，4×dNTP各125μmol/L，引物各10pmol，TaqplusⅠDNA聚合酶1U，10×