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1、中药免疫调节剂对小鼠细胞免疫功能的影响论文.freelL/L浓度的含药血清优于100mL/L浓度的含药血清（P0.05）。结论:该中药免疫调节剂能显著促进免疫抑制小鼠淋巴细胞的转化,.freelresco公司）,以pH7.2的RPMI1640培养液制成5g/L溶液;PHA（Sigma公司）,以pH7.2的RPMI1640培养液制成200mg/L溶液;小牛血清(杭州四季青生物工程有限公司,批号:051215);环磷酰胺（Cy,上海华联制药有限公司,批号:050306）;中药免疫调节剂（ZY）:黄芪、茯苓、白术、防风、甘草、桔梗组成复方免疫调节剂,采用自动循环煎药机提取浓缩,按照生药量计
2、算使终浓度为300g/L,购自山东泰安工商联医药商行。玉屏风散（YPF）:选自《中国兽药典》;MC0175型CO2恒温培养箱（日本SANYO）;COIC3168型倒置相差显微镜（重庆光学仪器厂）;2010型BLOCELLHT系列酶标仪（郑州博塞生物工程有限责任公司）;SI1640培养液调整细胞密度至5×109/L,并用台盼蓝染色检测细胞活力95%。1.2.4脾淋巴细胞增殖反应的测定1.2.4.1含药血清对正常小鼠脾淋巴细胞转化的影响当血清浓度为50mL/L时,在96孔细胞培养板上,每孔加入50μL5×109/L小鼠脾淋巴细胞,45μL不含血清的RPMI1640及5μL含药血清;当血清
3、浓度为100mL/L时,在96孔细胞培养板上,加入50μL5×109/L小鼠脾淋巴细胞,40μL不含血清的RPMI1640液及10μL含药血清。每组血清设4个重复孔,并与同等浓度的小牛血清RPIM1640液作比较,同时设培养液空白对照。1.2.4.2各试验组小鼠脾细胞的淋巴细胞转化试验在96孔细胞培养板上,每孔加入用含100mL/L小牛血清RPMI1640稀释的5×109/L小鼠脾淋巴细胞95μL,A、B、C、D4横排各孔均加入不含血清的RPMI1640液5μL,E、F、G、H4横排各孔均加入200mg/L的PHA5μL,每组细胞设4个重复孔,并用含100mL/L小牛血清的RPMI1
4、640作空白对照。上述细胞均置37℃、50mL/LCO2及饱和湿度下培养44h,各孔加5g/L的MTT10μL,继续培养4h后,加入SDSDMF溶解液50μL,30min后用酶标仪测A570,结果用刺激指数（SI）表示:SI＝试验孔A均值/对照孔A均值×100%。1.2.5数据处理应用统计软件SPSS10.0进行分析,所有数据用均值±标准差（x±s）表示。2结果2.1各组小鼠脾淋巴细胞转化结果Cy对照组小鼠脾淋巴细胞转化的A570值明显低于正常对照组,有统计学差异（P005）;中药免疫调节剂组和玉屏风散组小鼠脾淋巴细胞转化的A570值与正常对照组差异无统计学意义（P0.05）;而Cy
5、+中药免疫调节剂组和Cy+玉屏风散组小鼠脾淋巴细胞转化的A570值明显高于正常对照组（P0.05）,且Cy+中药免疫调节剂组对于淋巴细胞转化的促进作用优于Cy+玉屏风散组（P0.05）。另外,在PHA的刺激下,各组淋巴细胞转化的A570值都有了显著提高,且以Cy+中药免疫调节剂组及Cy+玉屏风散组最为明显（P0.05,表1）。表1各组小鼠脾淋巴细胞转化结果（略）注:同一列数值标有相同字母者之间无统计学意义;标有不同字母者之间有统计学差异(P0.05),下表同.表2含药血清对小鼠脾淋巴细胞转化的影响（略）2.2含药血清对小鼠脾淋巴细胞转化的影响在健康小鼠脾淋巴细胞的转化试验中,无论加入
6、浓度为50mL/L还是100mL/L的各试验组血清,Cy+中药组及Cy+玉屏风散组A570值明显高于其他组（P0.05）;Cy对照组A570值明显低于正常对照组（P0.05）;单纯的中药组和玉屏风散组A570值与正常对照组差异无统计学意义（P0.05）,但均高于Cy组血清（P0.05）。说明含药血清对免疫功能异常小鼠具有明显的免疫调节功能,且在50mL/L血清浓度时Cy+中药组血清的促进淋巴细胞转化作用优于Cy+玉屏风散组（P0.05）。50mL/L血清浓度与100mL/L血清浓度相比,有统计学差异（P0.05,表2）。3讨论目前,检测淋巴细胞转化最常用的方法是同位素掺入法和MTT法
7、,实验证明两种方法具有显著的相关性4。本试验中选用MTT法研究中药免疫调节剂对小鼠细胞免疫功能影响。多次重复试验结果表明,在对试验各影响因素进行充分优化的基础上,MTT法的确简便实用,重复性好。“玉屏风散”为扶正固表的经典方剂,近年来大量的体内外研究表明其对免疫系统存在着较为广泛的影响5。玉屏风散含药血清具有明显活化小鼠白细胞和腹腔巨噬细胞作用,对脾淋巴细胞增殖、IL2产生有促进作用,对NK细胞的活性有明显的增强作用6;因此我们的试验选用“玉屏风散”为对照
