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1、中药免疫调节剂对小鼠细胞免疫功能的影响作者：刘翠艳,赵宏坤，韩春杨【关键词】中药免疫调节剂;,小鼠;,脾淋巴细胞转化;,含药血清 [摘要]目的:探讨中药免疫调节剂对正常小鼠及环磷酰胺(Cy)所致免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响。方法:以Cy诱导建立免疫抑制小鼠模型,给正常小鼠和免疫抑制小鼠饮服中药及生理盐水,采用MTT法检测淋巴细胞的增殖反应情况。结果:试验各组小鼠脾细胞在48h培养时间内淋巴细胞转化率与各组含药血清加入到正常小鼠脾细胞反应体系中,在相同培养时间内的淋巴细胞转化率呈高度正相关。表现为:在机体正常条件
2、下,两个中药组与正常组之间差异无统计学意义（P>0.05）,但均高于Cy组（P<0.05）;在免疫抑制条件下,两个中药组明显高于正常对照组和Cy组（P<0.05）,且中药免疫调节剂组优于玉屏风组（P<0.05）;另外,50mL/L浓度的含药血清优于100mL/L浓度的含药血清（P<0.05）。结论:该中药免疫调节剂能显著促进免疫抑制小鼠淋巴细胞的转化,而对正常小鼠作用不明显。 [关键词]中药免疫调节剂;小鼠;脾淋巴细胞转化;含药血清 目前,国内外在中药免疫调节剂的研究开发方面,研究
3、单味药和其所含的单体成分（最多的是多糖,其次为有机酸、甙类、生物碱、黄酮等）占多数[1-3],复方研究较少且不深入。但是,正是复方制剂的复杂成分才获得了单味药和单体成分所不具备的药效整体性和协同互补作用,使疗效增强、毒副作用减少,在实际应用中更具优势。为此,我们根据中药方剂的组成原则,结合现代药理学研究成果,以具有免疫调节作用的经典方剂“玉屏风散”为对照,通过体外筛选、毒性测定,最后由黄芪、茯苓、白术、甘草、防风、桔梗6味药组成了复方中药免疫调节剂,并用MTT法探讨了该中药免疫调节剂对正常小鼠及Cy所致免疫抑制小鼠
4、细胞免疫功能的影响。 1材料和方法 1.1材料RPMI1640培养基（Gibco公司）;MTT（四甲基偶氮唑盐,Amresco公司）,以pH7.2的RPMI1640培养液制成5g/L溶液;PHA（Sigma公司）,以pH7.2的RPMI1640培养液制成200mg/L溶液;小牛血清(杭州四季青生物工程有限公司,批号:051215);环磷酰胺（Cy,上海华联制药有限公司,批号:050306）;中药免疫调节剂（ZY）:黄芪、茯苓、白术、防风、甘草、桔梗组成复方免疫调节剂,采用自动循环煎药机提取浓缩,按照生药量计算使
5、终浓度为300g/L,购自山东泰安工商联医药商行。玉屏风散（YPF）:选自《中国兽药典》;MC0175型CO2恒温培养箱（日本SANYO）;COIC3168型倒置相差显微镜（重庆光学仪器厂）;2010型BLOCELLHT系列酶标仪（郑州博塞生物工程有限责任公司）;SI1640培养液调整细胞密度至5×109/L,并用台盼蓝染色检测细胞活力>95%。 1.2.4脾淋巴细胞增殖反应的测定 1.2.4.1含药血清对正常小鼠脾淋巴细胞转化的影响当血清浓度为50mL/L时,在96孔细胞培养板上,每孔加入50μL5×1
6、09/L小鼠脾淋巴细胞,45μL不含血清的RPMI1640及5μL含药血清;当血清浓度为100mL/L时,在96孔细胞培养板上,加入50μL5×109/L小鼠脾淋巴细胞,40μL不含血清的RPMI1640液及10μL含药血清。每组血清设4个重复孔,并与同等浓度的小牛血清RPIM1640液作比较,同时设培养液空白对照。 1.2.4.2各试验组小鼠脾细胞的淋巴细胞转化试验在96孔细胞培养板上,每孔加入用含100mL/L小牛血清RPMI1640稀释的5×109/L小鼠脾淋巴细胞95μL,A、B、C、D4横排各孔均加入不
7、含血清的RPMI1640液5μL,E、F、G、H4横排各孔均加入200mg/L的PHA5μL,每组细胞设4个重复孔,并用含100mL/L小牛血清的RPMI1640作空白对照。上述细胞均置37℃、50mL/LCO2及饱和湿度下培养44h,各孔加5g/L的MTT10μL,继续培养4h后,加入SDSDMF溶解液50μL,30min后用酶标仪测A570,结果用刺激指数（SI）表示:SI＝试验孔A均值/对照孔A均值×100%。 1.2.5数据处理应用统计软件SPSS10.0进行分析,所有数据用均值±标准差（x±s）表示。
8、 2结果 2.1各组小鼠脾淋巴细胞转化结果Cy对照组小鼠脾淋巴细胞转化的A570值明显低于正常对照组,有统计学差异（P<005）;中药免疫调节剂组和玉屏风散组小鼠脾淋巴细胞转化的A570值与正常对照组差异无统计学意义（P>0.05）;而Cy+中药免疫调节剂组和Cy+玉屏风散组小鼠脾淋巴细胞转化的A570值明显高于正常对照组（P<0.05）
