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1、大鼠马尾神经急性压迫性损伤模型的建立【摘要】目的：建立一种大鼠马尾神经急性受压性损伤的动物模型.方法：将36只SD大鼠随机分为对照组(A组),1d实验组(B组),7d实验组（C组）及21d实验组(D组),每组动物9只.将平头金属螺钉自L6椎板紧贴棘突拧入各实验组大鼠椎管,取术后1，7，21d不同时间的动物采用联合行为评分（CBS）、测定脊髓诱发电位（SCEP）潜伏期值进行综合评判,并取骶髓进行HE染色，观察脊髓神经元形态学改变.结果：在螺钉拧入椎管后,HE染色显示大鼠骶髓前角细胞发生明显的形态改变,术后的CBS评分1d：(17.89±1.27)分，7d：(9.78±1.30)分，21d：
2、(9.33±1.41)分;脊髓诱发电位(SCEP)潜伏期值1d：(4.29±0.51)ms，7d：(4.35±0.54)ms，21d：(4.91±0.53)ms,与对照组相比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论：建立的马尾急性压迫性损伤模型,操作简便,重复性好,为进一步研究马尾急性压迫损伤奠定了基础.【关键词】马尾；急性损伤；疾病模型，动物；大鼠 马尾神经损伤大多是由于马尾神经的直接压迫所致,最常见的是腰椎间盘急性突出和下腰椎爆裂性骨折［1-3］,临床主要表现为鞍区感觉、排尿、排便以及双下肢功能障碍,一旦发病治疗效果不甚满意［4］.为了寻求新的更有效的治疗药物或方案，需要有可靠
3、性高、重复性好的病理模型．近年来各国学者制作了多种动物模型［5-6］.但由于上述研究中须手术施行部分椎板切除,手术操作较复杂,局部创伤大,周围组织结构也遭到不同程度的破坏.我们根据马尾神经损伤的临床特点，从急性压迫性损伤角度出发,采用了体积较小、实验使用频率较高的大鼠建立动物模型,马尾神经一次压迫到位,术后观察持续压迫所致的行为学改变、电生理传导改变、组织病理学改变等,以综合评价制作该模型手术操作可靠性及可重复程度，为进一步研究马尾神经压迫损伤奠定基础. 1材料和方法 1.1材料 36只清洁级雄性SD大鼠,体质量190～210g,由第四军医大学实验动物中心提供.选用不锈钢医用指骨自攻螺
4、钉,锉平钉头,改装成直径1.5mm,螺距0.5mm,长5mm的平头加压螺钉.E8000诱发电位仪(丹麦丹迪公司);莱卡LA全自动显微镜配美国Pixera600C数码摄像头彩色病理图文分析系统,由第四军医大学西京医院全军骨科研究所实验室提供. 1.2方法 1.2.1动物制模及分组 动物术前1d行腰骶部备皮,手术时用10g/L戊巴比妥钠(5mL/kg)腹腔麻醉,取背正中切口显露L6～S1的椎板,于L6椎板与棘突移行部中点行椎板钻孔,将平头加压螺钉放置于椎板孔中,利用其自攻特性,轻微加压旋入椎管,根据旋入圈数控制进入的深度即0.5mm/圈.将36只SD大鼠随机分为4组：A组(对照组),施行
5、后路切开、椎板钻孔手术,不放置加压螺钉,因而不产生压迫；B组,放置加压螺钉压迫马尾神经1d；C组,放置加压螺钉压迫马尾神经7d；D组,放置加压螺钉压迫马尾神经21d.B，C，D组在X线透视下将加压螺钉植入椎管矢状径的1/2,形成马尾神经的压迫性损伤. 1.2.2行为学观察 分别对各组大鼠于术前1d，术后1，7和21d，参照 2结果 2.1脊髓神经功能评分 对照组大鼠麻醉苏醒后,双后肢运动逐渐恢复,1d后即与术前无明显差别.各实验组大鼠术后1d仍可见双后肢跛行,甩尾无力；术后1～21d神经功能有不同程度恢复,但对牵拉、疼痛、压力刺激的回缩反应减退,甩尾无力.术后CBS评分各实验组与对
6、照组相比差异具有统计学意义(P<0.05，表1).表1各组的CBS评分比较(略) 2.2诱发电位检测 马尾神经受到急性压迫后,脊髓诱发电位(SCEP)潜伏期值增大,神经传导时间延长,各组SCEP潜伏期值结果比较见表2.A组单纯椎板钻孔,潜伏期值无明显变化(P>0.05),A组与B，C，D组间术后各时间点SCEP潜伏期值的变化有显著性差异(P<0.05),B，C，D组内压迫前与压迫后均有显著性意义(P<0.05),实验组术后1d与术后21d潜伏期值的变化差异具有统计学意义(P<0.05).表2手术前、后SCEP潜伏期值的比较(略) 2.3细胞形态学观察 对
7、照组:骶髓前角细胞结构正常,分布、着色均匀(图1A).实验组:术后1d时,骶髓前角细胞中的较多细胞出现结构变异,着色异常,细胞核浓聚,个别细胞裂解,但细胞膜完整(图1B)；7d时,大量细胞裂解,细胞核成为大小、数目不等的裂解小体(图1C)；21d时,正常细胞和裂解细胞数目减少,单位面积内正常前角细胞同对照组比较数量减少(图1D). 3讨论 建立有效的病理动物模型是对马尾神经损伤研究深入的前提,唯有建立标准
