中华补血草根提取物抗肿瘤活性的实验研究论文

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1、中华补血草根提取物抗肿瘤活性的实验研究论文【摘要】目的研究中华补血草根提取物(LimoniumsinenseKtzerootextract,LSE)的抗肿瘤活性。方法MTT法测定体外培养的肿瘤细胞HepG2的存活率，检测LSE对离体细胞增殖的影响;建立小鼠移植性黑色素瘤模型，检测LSE对荷瘤小鼠的抑瘤作用并测定小鼠脾脏指数和胸腺指数。结果0.2～0.8mg/mlLSE可剂量抑制肿瘤细胞HepG2的增殖;200，400，800mg/kgLSE对荷瘤小鼠实体瘤具有显著抑制作用，抑制率分别为18.6%、40.7%及49.0%。且各剂量组小鼠胸腺指数高于模型组小鼠。结论LSE具有

2、显著抗肿瘤活性和一定免疫调节作用。【关键词】中华补血草;抗肿瘤活性;免疫调节白丹花科补血草属植物中华补血草Limoniumsinense(Girard)Kuntz，又名匙叶草、盐云草、海菠菜、海赤芍等，为多年生泌盐草本植物.freela公司生产;FBS(胚胎牛血清)，美国Hyclone公司产品;DMEM培养基，美国Gibco公司产品;其他试剂均为国产分析纯。2方法2.1最大耐受量实验标准体重ICR小鼠20只，分为正常对照组及LSE组，每组10只。LSE用生理盐水配制成1g/mlLSE液。LSE组小鼠以上述LSE液按0.25ml/10g体重灌胃给药(相当于25g提取物/kg

3、体重)，正常对照组小鼠以同样体积生理盐水灌胃，给药后连续观察14d，考察LSE的毒性。2.2离体培养肿瘤细胞模型的建立将对数生长期的肿瘤细胞HepG2用含10%胚胎牛血清的DMEM培养基制备成5×104个/ml的细胞悬液，按每孔100μl接种于96孔板，37℃，5%CO2温育24h后，分组给药，给药终浓度为0.05，0.2，0.4，0.6，0.8mg/ml的LSE。给药后继续培养。2.3MTT试验将“2.2”中给药后培养48h的肿瘤细胞HepG2，弃去上清，加入无血清培养基100ml,MTT(5.0mg/ml)20μl，37℃孵育4h，弃去上清，每孔加入100μlDMSO

4、，振荡数分钟，在Bio-RAD680全自动酶标仪上读取570nm处吸光度值(OD570nm)。以OD570nm值表示细胞存活率，据此检测肿瘤细胞HepG2的存活率。2.4小鼠移植性黑色素瘤模型的建立取C57小鼠50只，于每只小鼠右侧腋窝皮下接种B16-F10黑色素瘤细胞悬液0.1ml(5×105个细胞)。随机分成模型(Control)组，环磷酰胺(CTX，20mg/kg，阳性对照)组，200，400，800mg/kgLSE组，每组10只。分别用生理盐水、相应剂量CTX和LSE灌胃，1次/d，连续灌胃14d。2.5抑瘤率测定将“2.4”项中的C57小鼠，于末次给药后24h处

5、死，剥取瘤块，用滤纸吸干后，测量瘤的体积，并计算抑瘤率。抑瘤率(%)=(1-实验组瘤体积对照组瘤体积)×100%2.6脾脏指数和胸腺指数测定“2.4”项中的C57小鼠，于末次给药后24h处死，称量脾脏和胸腺重量，并计算脾脏指数和胸腺指数。2.7器官指数的计算心、肝、脾、肺、肾、胸腺等各器官指数按下列公式计算：器官指数(%)=器官重量小鼠重量×100%2.8统计方法进行单因素方差分析(oneanKeuls-q)检验进行比较。显著性水平取a=0.05。3结果3.1LSE最大耐受量试验LSE最大耐受量试验结果见表1。小鼠灌胃给药后14d中，两组动物均无死亡。其中LSE组小鼠外观

6、正常，皮肤光滑，色泽光亮，心指数、肝指数、脾指数、肺指数等均处于正常范围，表明LSE对小鼠基本无毒性作用;而胸腺指数显著增大，提示其具有一定的免疫增强作用。3.2对离体培养的肿瘤细胞HepG2增殖的影响MTT法检测离体培养的肿瘤细胞HepG2存活率，发现0.20～0.80mg/mlLSE可显著抑制肿瘤细胞HepG2的增殖，且随着剂量增大，抑制作用增强，即抑制作用呈剂量依赖方式(见图1)，提示一定剂量的LSE有明显的体外抗肿瘤活性。表1中华补血草提取物最大耐受量实验3.3对移植性黑色素瘤小鼠实体瘤生长的影响由表2可见，LSE各组小鼠瘤体积明显减少。计算不同剂量LSE的抑瘤率

7、，发现各剂量LSE对瘤块的抑制率分别为18.6%，40.7%及49.0%，其中高剂量组(800mg/kgLSE)的抑瘤率和阳性对照环磷酰胺组无显著差异(见图2)。即LSE可以剂量依赖性抑制黑色素瘤细胞B16-F10在体内的增殖，表明LSE具有显著抑制动物肿瘤生长的作用。表2中华补血草全根提取物对移植性黑色素瘤小鼠瘤体积的影响表3中华补血草提取物对移植性黑色素瘤小鼠脾指数及胸腺指数的影响3.4LSE的免疫调节作用脾指数和胸腺指数测定结果表明，与模型组小鼠相比，LSE各剂量组小鼠脾指数均显著增加，并且800mg/kgLSE组小鼠脾