白茅根多糖超声提取的优化论文

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1、白茅根多糖超声提取的优化论文【摘要】目的确定白茅根多糖最佳超声提取条件,提取白茅根多糖,为白茅根的研究、开发利用提供理论依据。方法以白茅根多糖含量为考察指标,用苯酚-硫酸法进行含量测定,利用正交实验法确定白茅根多糖的最佳超声提取条件。结果提取次数和料液比对白茅根多糖提取率的影响起主要作用。超声提取的最佳工艺为:提取温度80℃,用20倍量的水,超声提取3h,提取3次.freelperatacylindrical(L.)P.Beauvvar.majorC.E.Hubb.的根茎[1],.freell)、提取温度(℃)、超声时间(h)、提取次数等因素,探讨确

2、定超声提取条件下提取多糖的最佳工艺条件。1仪器与试剂Spectrum54型紫外-可见分光光度计(上海棱光技术有限公司);KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);葡萄糖标准品(上海市国药集团化学试剂有限公司),白茅根(济宁邦尔中药饮片有限公司)经鉴定为禾本科植物白茅Imperatacylindrical(L.)P.Beauvvar.majorC.E.Hubb.的根茎。2方法与结果2.1白茅根多糖的优化提取2.1.1标准葡萄糖溶液的配制精密称取干燥恒重的葡萄糖标准品25.2mg,加适量水溶解,转移到250ml容量瓶中,加水至刻度,配

3、成浓度为100.8μg/ml标准葡萄糖溶液备用。2.1.25%苯酚试剂的配制取苯酚100g,加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g,蒸馏。收集182℃蒸份,称取7.5g,加水150ml溶解,置棕色瓶内放冰箱备用。2.1.3标准曲线的绘制精密量取葡萄糖标准溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7ml置于干燥试管中,分别加水使成1.0ml。再分别加入5%苯酚溶液1.6ml,摇匀,然后加浓硫酸7.0ml,充分摇匀,室温放置25min,在490nm处测定其最大吸收度,同时做一空白。以吸收度(A)为纵坐标,溶液的浓度(μg/ml)为横坐标,得回归

4、方程为:A=0.0077C-0.0452,相关系数r=0.99975,可见葡萄糖的浓度在10.08~70.56(μg/ml)范围内,溶液的吸收度(A)与浓度(μg/ml)呈良好的线性关系。2.1.4正交实验设计白茅根主要有效成分一系列高分子量的多糖物质易溶于水,难溶于有机溶剂。因此,参照超声提取多糖的相关文献资料,白茅根多糖提取工艺可采用不同水量反复提取,选择主要影响提取效率的料液比(g/ml)(A)、提取温度(℃)(B)、超声时间(h)(C)、提取次数(D)作为考察因素,因素水平安排见表1。运用L9(34)正交实验设计,见表2。表1因素水平(略)2

5、.1.5白茅根多糖样品的制备白茅根样品的处理:称取白茅根小段块300g(0.2~0.5cm),经石油醚(60~90℃)500ml回流脱脂两次,1h/次。再用80%乙醇回流提取两次,2h/次,以除去单糖和低聚糖,将药渣(a)烘干备用。称量:称量已处理好的白茅根27份,每份5.00g。超声提取:按表3设定的提取温度、超声时间、提取次数和料液比,加蒸馏水进行操作,按条件超声提取,每个实验号做3次平行实验。浓缩:合并每次实验的提取液,减压浓缩至150ml,加少量活性炭脱色,过滤。醇沉:滤液加5倍量95%乙醇,放置过滤,离心,去除上清液,离心下面的絮状物,在4

6、000r/min下,离心15min。洗涤:沉淀用水100ml溶解重复用乙醇沉淀1次,沉淀用乙醇、丙酮多次洗涤。干燥:在4000r/min下,离心15min后,取沉淀物放在电热恒温干燥箱内60℃下烘干,即得白茅根多糖。2.1.6样品液的配制与测定将白茅根多糖于研钵中研成粉末后,分别置于500ml的容量瓶中,再从中精密吸取10.0ml,放入100ml的容量瓶中作为多糖储备液。精确量取多糖储备液1.0ml,按测定标准曲线同样的方法测其吸收度,代入回归方程,结果见表2。表2正交实验结果L9(略)由表3正交实验的结果显示,影响白茅根多糖提取率的因素主次顺序为:

7、提取次数(D)料液比(A)超声时间(C)超声温度(B)。因此,白茅根多糖超声提取的最佳工艺组合为:A2B3C3D3。表3方差分析(略)由正交实验的方差分析(见表3)结果显示:提取次数和料液比的差异显著对白茅根多糖提取率的影响起最主要作用,超声时间和超声温度在此实验范围内没有显著差异,对测定结果的影响较小,与直观分析结果(见表2)相吻合。2.1.7验证实验取白茅根(a)50g,加水1000ml浸泡过夜后,在80℃下超声提取3次,3h/次。合并3次提取液,加少量的活性炭脱色,减压浓缩至150ml,加入95%乙醇使溶液含乙醇量达80%,放置过夜,过虑,沉淀

8、用95%乙醇、丙酮反复抽洗,得到多糖纯品(I),60℃烘干,称得质量为3.165g。将其于研钵中研成粉末后精

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