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1、白茅根多糖的提取与含量测定论文.freelizetheextractingconditionsofpolysaccharidefromImperataCylindricaandestablishasuitablemethodforitscontentdetermination.MethodsBasedonthequalitativeyieldofpolysaccharideextraction,aorthogonaltestployedtoevaluatetheeffectoffourfactorsincludingextractingtemperat
2、ure,extractingtime,theextractiontimesandtheratioofmaterialtoliquid.Thephenol-densesulphuricacidmethodinationofpolysaccharide.ResultsThetimesofextractionandtheextractingtemperatureinfluencedthecontentofpolysaccharidesmostly,ountofumextractionconditionesat85℃for3hours,.freele.Thec
3、ontentsofpolysaccharideinImperataCylindricacollectedfromtperataCylindrica;polysaccharide;orthogonaldesign;phenol-densesulphuricacidmethod;contentdetermination白茅根ImperataCylindrica(L.)Beauv.var.major(Nees)C.E.Hubb.为禾本科植物白茅的根茎,具有凉血止血、清热利尿的功效,临床主要用于治疗急性肾炎、急性传染性肝炎等1。白茅根的成分以三萜类化合物为主,
4、含有葡萄糖、少量果糖和木糖等。白茅根具有极大的药用与食用价值,而多糖为其最主要的成分之一。已有实验表明,白茅根多糖具有明显提高小鼠耐缺氧能力2。白茅根味道甘甜,口感醇厚,国内很多地方都有咀嚼、食用的习惯,是难得的食品添加剂,工业上可作为优良的清热、消暑饮料的原料3-4。实验表明,白茅根毒性小,食用比较安全,小鼠LD50高达20g/kg以上5。然而,目前白茅根潜在的市场价值还远没有开发出来。我们以白茅根多糖含量为考察指标,用苯酚-硫酸法进行含量测定,考察料液比、提取温度、提取时间、提取次数等因素,确定提取多糖的最佳工艺条件。同时,比较河北安国和安徽亳州两
5、产地的白茅根中的多糖含量,为进一步的市场开发利用提供理论基础。1仪器与试药台式高速离心机(LG10-24A北京医用离心机)、电热恒温鼓风干燥箱(DHG-9070上海三发科学仪器)、HJ-3控温磁力搅拌器(江苏金城国胜实验仪器)、电子天平(AK1140奥豪斯仪器)、TU-1901双光束紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器)、HH-2数显恒温水浴锅(国华电气)、FD-1D-50冷冻干燥机(北京博医康实验仪器)。白茅根产地为亳州和安国,购于亳州中药材市场,由安徽科技学院时维静教授鉴定。葡萄糖对照品(分析纯,国药集团,批号F20071214)。2方法2.1对
6、照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的葡萄糖0.250g,用重蒸水定容至250mL,配成质量浓度为1.0mg/mL的储备液。2.2苯酚精制及配制称取苯酚100g,加铝片0.1g与碳酸氢钠0.05g,蒸馏收集182℃馏分,吸取此馏分5mL,加水至100mL,置棕色瓶中,即得。2.3白茅根多糖的提取2.3.1前处理称取350g白茅根粉末,加适量石油醚(60～90℃)回流2次,每次1h,倒出石油醚,烘箱中60℃烘干,用80%乙醇回流提取2次,每次1.5h。处理后的药材粉末在烘箱中60℃烘干。2.3.2水提取粗多糖称取前处理后的药材10g,置于250mL圆底烧瓶中
7、,按照正交表所列出的工艺条件在水浴锅中回流提取。过滤,合并每次试验的提取液,浓缩至10mL左右,加4倍量的95%乙醇醇沉,静置24h,得沉淀部分。沉淀用适量无水乙醇、乙醚、丙酮依次洗涤,干燥,得粗多糖。每组样品平行3次。2.3.3后处理(纯化粗多糖)Sevag法去蛋白：用5mL水溶解粗多糖,加入氯仿-正丁醇(4∶1),在磁力搅拌器上搅拌15min,3000r/min离心15min,除去两相界面处的蛋白质,循环操作数次,直到界面处无蛋白相。装样于处理后透析袋中,在蒸馏水中透析3d,每隔6h换水1次。透析好后将样品放于培养皿里面,冷冻干燥12h,得精多糖。
8、2.3.4透析袋前处理把透析袋剪成长度为15cm左右的小段,相继在500mL的2%(mol/L
