亚麻fad2基因克隆、载体构建与遗传转化

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1、亚麻FAD2基因克隆、载体构建与遗传转化第一章文献综述1.1前言亚麻(LinumusitatissimumL.)隶属亚麻科亚麻属，是北温带地区一种分布很广的重要油料作物。栽培亚麻通常分为纤维用型、油用型和油纤兼用型。油用亚麻俗称胡麻，是重要的油料作物。亚麻籽的主要成分是油脂和蛋白质，其含油率高，通常能够达到35%-45%，其中人体必需不饱和脂肪酸含量很高。目前，世界上亚麻主要种植国家有加拿大、中国、印度、俄罗斯、美国、英国等。我国具有悠久的亚麻栽培历史，目前在世界亚麻生产中占重要地位。联合国粮农组织

2、统计数据显示，2007-2011年，中国油用亚麻年平均种植面积达34.09万hm2，占同期世界油用亚麻平均总面积的18.50%，低于加拿大和印度，居世界第三位；年平均总产量达32.52万t，占同期世界平均总产量的19.03%，仅次于加拿大，居世界第二位。亚麻种植主要分布于我国西北、华北等地的高寒、干旱地区，其中西北地区种植面积最大，占全国62%左右，华北地区种植面积占全国种植面积的37%，其他地区仅占1%左右。亚麻油中含有多种脂肪酸，主要包括油酸（C18:1）、亚油酸（C18:2）、亚麻酸（C18:

3、3）等，此外含有较高的食用纤维、矿物质、维生素A、B、D、E以及卵磷脂、木酚素等营养成分[1]。大量科学研究证明，经常食用高油酸植物油能够降低人体内的血脂和胆固醇水平[2,3]；不饱和脂肪酸中的亚油酸和亚麻酸具有降血脂、抗炎症、抗血栓形成、预防冠心病、舒张血管及促进视力和视网膜发育等功效[1,4,5]。亚麻籽中的木酚素具有抗癌、预防糖尿病的作用。脂肪酸的种类及比例，对植物油脂品质有重要影响。不同脂肪酸具有不同的营养价值和用途。富含单不饱和脂肪酸的植物油，具有防止人体血液中胆固醇和血脂增高的作用，且加

4、工品货架期长[6,7]。而多不饱和脂肪酸具有重要的药用价值及保健作用[1,4,5]。..1.2植物脂肪酸的合成代谢研究1957年，iniKit提取总RNA，按试剂盒说明书操作。Ⅰ实验前准备：使用前在1mLBufferRLT中加入10μLβ-ME，该Buffer在室温下可保存一个月；在BufferRPE中加入4倍体积的无水乙醇。..第三章结果与分析.......283.1LuFAD2基因的克隆及序列分析.......283.2阳性克隆质粒DNA的提取及酶切.......363.3载体构

5、建.......373.3.1亚麻LuFAD2基因过表达载体的构建.......373.3.2亚麻LuFAD2基因RNAi载体的构建.......393.4遗传转化结果.......39第四章结论与讨论.......434.1LuFAD2基因的克隆.......434.2亚麻的遗传转化.......434.3不同载体转化结果的差异.......434.4不定芽诱导和生根.......444.5GUS组织化学染色.......444.6Gateg/L），发现不定芽分化率很低，远不及对照（非转化愈伤）分

6、化能力强，甚至有相当一部分愈伤一直未见分化。但是加大培养基中6-BA的量后（加至1.5mg/L），发现转化愈伤的分化率明显增高，不定芽数目显著增多。这可能是由于转化后，农杆菌的影响及筛选剂的抑制作用，使其在相对较低的生长素浓度下不易分化，因而需要更高浓度的生长激素才能促进分化出芽。将转化获得的抗性苗接入生根培养基，发现生根效果不及对照（未经转化的愈伤苗）好，转化苗生根率不到10%。将抗性苗接入含有0.5%活性炭的生根培养基上，生根效果依然不佳，与不加活性炭的培养基没有区别。亦可能因为转化后的亚麻生长

7、所需条件和环境不同于非转化亚麻。因此，对转化后亚麻抗性苗的生根还有待进一步探索和优化。