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1、实时荧光RT论文李振勇，邵大晓，冯艳铭，李智涛，景建洲，王云龙，屈凌波，赵玉芬【关键词】,SARS病毒RealtimefluorescentRTPCRquantitativedetectionofSARSCoVinserumofinfectedpatients【Abstract】AIM:TodetectSARSCoVinvariousclinicalspecimenssuchassputum,garglingliquid,throatsspecimensfromSARSpatientsbyrealtimeRTPCR.T
2、heviralloadinSARSCoVpositiveserum1×105-1×107copies/L.Theviralloadinserumsamplesens.CONCLUSION:Thereisnosignificantrelationshipbet【摘要】目的：阐述SARS患者病程与血清中SARS病毒含量间的关系.方法：采用高灵敏度荧光实时定量RTPCR方法.freele，SARS）［1］，主要通过近距离密切接触传播.从各种样本中检测SARSCoV非常重要，不仅能更好地治疗，而且能早期有效地控制疾病传播.采用
3、定量RTPCR方法对患者痰液、漱口液、咽拭子和粪便中SARSCoVRNA进行检测，证明了这些样本中病毒含量很高，具有传染性［2,3］.而患者血液样本中阳性检出非常少.20030516atthiasNiedrig先生惠赠，灭活病毒含量为9.4×109copies/L；抗核酸酶SARS病毒样核蛋白颗粒悬浮液（本实验室自制）［5］，浓度为1.8×1013copies/L.SARS荧光PCR定量检测试剂盒由华美生物工程公司提供.SARS患者血清156份来自于小汤山、北京地坛等医院的-70℃储存的样本，临床诊断符合卫生部标准.甲
4、肝、乙肝、丙肝、戊肝、庚肝，TTV，HIV,巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、沙眼衣原体、肺炎支原体阳性标本和正常人血清、人基因组DNA来源于华美生物工程公司PCR室.使用美国PE公司的PE7700荧光扩增仪.SARS荧光定量PCR试剂盒由华美生物工程公司生产.荧光PCR检测的靶序列选择在病毒RNA聚合酶基因上，该区域极为保守［6］.使用的PCR引物和探针分别为SARSUP：5′cgcaagtattaagtgagatggtc3′；SARSLP5′aagcagttgtagcatcaccg3′.荧光探针：5′FAMgcggctca
5、ctatatgttaaaccaggtggaaTAMRA3′.1.2方法血清样本的处理、RNA反转录、荧光PCR检测和结果判读均按照试剂盒说明书进行操作.采用试剂盒中提供的5×105，5×106，5×107和5×108copies/L的血清稀释病毒样颗粒构建标准曲线.阴性对照为正常人血清，以正常人血清稀释的抗核酸酶SARS病毒样核蛋白颗粒悬浮液为阳性对照.为了确认定量的精确程度，检测L,TanSH,SeeEE,etal.Entryandearlyeventsofsevereacuterespiratorysyndrome
6、coronavirus［J］.JMedVirol,2003;71:323-331.［2］KsiazekTG,ErdmanD,GoldsmithCS,.freele［J］.NEnglJMed,2003;348:1953-1966.［3］rostenC,GuntherS,Preisered,2003;348:1967-1976.［4］NgEK,HuiDS,ChanKC,etal.QuantitativeanalysisandprognosticimplicationofSARScoronavirusRNAintheplas
7、maandserumofpatientse［J］.ClinChem,2003;49(12):1976-1980.［5］李振勇，景建洲，刘明霞，等.含SARSCoVRNA病毒样颗粒的构建和表达［J］.第四军医大学学报，2004；25（20）：1858-1861.LiZY,JingJZ,LiuMX,etal.ConstructionandexpressionofviruslikeparticlescontainingSARSCoVRNA［J］.JFourthMilMedUniv,2004;25(20):1858-1861.
8、［6］MarraMA,JonesSJ,AstellCR,etal.ThegenomesequenceoftheSARSassociatedcoronavirus［J］.Science,2003;300:1399-1404.［7］杨洁,王战会,陈金军，等.SARS冠状病毒多聚酶基因临床检测方法的建立［J］.第一军医大学学报,2003
