y染色体微缺失与男性不育相关论文

《y染色体微缺失与男性不育相关论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、Y染色体微缺失与男性不育相关论文.freelale;Ychromosome;chromosomedeletion;genesAbstract:AIMToevaluatethemicrodeletionofYchromo-someininfertilemeniaandoligo┐zoospermia.METHODS18patientsia，12iaand5iaalfertilemaleserasechainreactionedtodetectmicrodeletinofYchromosomeingen

2、omicDNAofsemen，andaseriesof18sequencetaggedsites（STSs）mappedosomeosomemicrodeletionalesia，andin3ofthe12malesia.Nosuchdele-tionicmalesand10normalfer-tilemen.The3patternsofmicrodeletionosomemicrodeletionmightbecloselyrelatedtospermatogenicfailure.0引言全世界约

3、15%的夫妇不育.freelolL-1氯化钠、双蒸水和酚氯仿（V∶V∶V∶25∶24∶1），离心取上层，加无水乙醇离心，75mLL-1乙醇洗涤，双蒸水溶解DNA.紫外分光光度计及20gL-1琼脂糖凝胶电泳鉴定其纯度及含量.提取的DNA置-20℃保存.缺失筛查采用美国Promega公司生产的Y染色体缺失检测系统（YchromosomeDeletionDetectionSystem，Versisn1.1Part#TM234），其包含有Y染色体上与精子生成基因最相关的18个已知序列标记位点引物对.同时扩增

4、18个非多态序列标记位点短DNA片段（分别位于AZFaAZFbAZFcAZFd区域，Fig1）.扩增产物长度为83～370bp，琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶染色观察.试剂盒提供对照梯度标准物.检测系统分A，B，C，D4组反应液，每组内均有一对照引物扩增X连锁的SMCX位点，以作为扩增反应效果和DNA完整性对照.另外设正常男性DNA阳性对照及空白阴性对照.如果测试样品不能扩增出Y染色体特定区域，则意味着测试样品Y染色体有该区域微缺失.初筛异常标本经2～3次PCR重复检测证实.PCR总反应体积25μL，循环

5、条件:94℃2min，94℃1min，57℃30s，72℃1min，35个循环，最后72℃延伸5min，4℃保温.扩增产物在20gL-1琼脂糖凝胶，1×TBE缓冲液及5Vcm-1电流条件下电泳.经UV-150紫外线透射分析仪照射后，复日科技FR-2000紫外与分析可见装置扫描成像.2结果35例异常精液标本除5例无精子症外，余30例少精症中28例伴有精子活率低下，精子活率范围3.0%～46.6%，平均25.3%.10例对照男性其精子数量及活率正常.所有精液标本采用氛氯仿抽提法提出了精液基因组DNA，经

6、多重PCR扩增，电泳显示特异性SMCX带（83bp），示多重PCR扩增反应有效，提取的DNA具有完整性.35例患者精液基因组DNA经多重PCR扩增检测后发现5例有Y染色体微缺失，缺失率14.3%，其中2例为少精症，3例为严重少精症.5例无精症患者和10例对照男性未发现Y染色体微缺失.缺失表现形式3种:1例AZFc（DAZ+SY157）+AZFb（SY130+SY128）缺失;1例AZFc（DAZ+SY157）+AZFd（SY152）缺失;余3例均为AZFc缺失（Fig1，Tab1）.5例缺失患者均有

7、AZFc缺失，无AZFa缺失，亦无AZFb和AZFd单独缺失.AZFc缺失片段各不相同，但包含有共同缺失片段DAZ（SY254，SY255，Fig1，2）.图1略表1Y染色体微缺失患者缺失部位、片段及精子密度、活率略3讨论我们发现35例不明原因性无、少精症患者中有5例显示Y染色体微缺失，10例正常对照无一例发现微缺失，提示Y染色体微缺失与男性精子发生相关.Y染色体微缺失发生率报道不一［2，3］.Foresta等［4］分析不育男性4800例Y染色体基因微缺失，发现无精症男性缺失率最高，其次是严重少精症

8、和少精症.我们的结果只发现严重少精症缺失率高于少精症，5例无精症患者无一例发现微缺失，与无精症患者样本量少可能有关.我们研究表明，缺失最多的部位亦为AZFc区中的DAZ基因，且所有DAZ基因缺失患者均有共同缺失片段:DAZ基因簇中的SY255和SY254，提示此两基因参与精子的发生.图2略关于Y染色体微缺失的机制说法不一，主要认为:①Y染色体在精子发生过程中，由于胚细胞快速分裂，与卵子发生过程相比具有更多突变机会;②Y染色体不能象常染色体一样进行DNA修复;③所有Y染