抗环斑病毒转基因番木瓜55

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1、抗环斑病毒转基因番木瓜55【关键词】,转基因；番木瓜55-1；　　摘要：目的建立对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定的检测方法。方法采用改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法及试剂盒方法进行番木瓜基因组DNA提取，根据番木瓜管家Papain基因和抗环斑病毒转基因番木瓜55-1品系的外源结构基因(35S-GUS)和调控基因(NOS-35S)序列设计合成特异性检测引物，采用PCR技术对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定。结果内源Papain基因PCR扩增结果表明，改良CTAB法及试剂盒方法都可用于番木瓜种籽及果肉的DNA提取。实验中合成的引物及建立的PCR反应体

2、系、反应参数能特异性地扩增转基因番木瓜55-1的外源基因35S-GUS序列和NOS-35S序列。该方法的绝对检测低限为815×10-2ng，相对检测低限为014％。结论本检测方法有较高的稳定性，能有效地对转基因番木瓜55-1进行品系鉴定，该方法的检测灵敏度可完全满足转基因食品标识管理定性检测的需要。　　关键词：转基因；番木瓜55-1；　　PCRPCRforevent-specificdetectionoftransgenicvirusresistantpapaya55-1　　Abstract：ObjectivePCRassayethylAmmoniumBromide(CTA

3、B)methodandQiagenDNeasyplantminikitpapayaseedandfruit.SpecificprimersforPCRdetectionofpapaya55-1plifyendogenouspapaingenesequenceandexternalsegments,35S-GUSandNOS-35S,andcorrespondingdetectionmethodsplificationofpapaingeneindicatedthatboththedevelopedCTABmethodandQiagenDNeasyplantminikitpa

4、payaseedandfruit.Resultsofamplificationoftheexternalsegments(35S-GUSandNOS-35S)indicatedthatthedevelopedmethoditofdetection(LOD)ofthemethodgotto8.15×10-2ngand0.14%respectively.ConclusionThedevelopedPCRmethodcandetecttransgenicvirusresistantpapaya55-1speciallyanddetectivesensitivitycansatis

5、fytheneedofqualitativedetectionforgeicallymodifiedfoods.　　Keyodified;papaya55-1;PCR　　番木瓜属热带亚热带重要水果，为有效控制番木瓜环斑病毒(PRSV)对番木瓜产业的威胁，1998年世界上第1个转基因番木瓜品系――抗环斑病毒转基因番木瓜55-1在美国和加拿大获准商业种植〔1，2〕。从此转基因番木瓜55-1以其独特的抗病优势被广泛种植，每年都有大量转基因番木瓜流入国际水果市场。本研究采用改良十六烷基-三甲基-溴化铵(CTAB）法及试剂盒方法进行番木瓜基因组DNA提取，根据番木瓜管家Papain基

6、因和抗环斑病毒转基因番木瓜55-1品系的外源结构基因(35S-GUS)和调控基因(NOS-35S)序列设计合成特异性检测引物，采用PCR技术，建立对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定的检验方法，为今后转基因番木瓜的标识管理及安全性评价提供技术支持。　　1材料与方法　　11材料转基因番木瓜55-1种籽由香港政府化验所友情提供。市场抽检番木瓜购自深圳市翠竹万佳超市及深圳市田贝一路街边水果店。　　12仪器和试剂MJRPTC-220扩增仪，SynGeneGeneGenius凝胶成像系统，EppendorfBiophotometer核酸蛋白分析仪。植物DNA提取试剂盒(美国Q

7、iagen公司)；TaqDNA聚合酶、UNG酶(美国Promega公司)。　　13DNA提取　　131样品前处理取番木瓜种籽，自然晾干后破碎至约05mm左右备用。番木瓜果肉直接破碎成泥，离心去水相后备用。　　132试剂盒DNA提取方法采用DNeasyPlantMiniKit试剂盒(美国Qiagen公司)，并按使用说明操作。　　133改良CTAB法取100mg处理好的样品至2ml离心管中，加入500μl2％CTAB裂解液，65℃水浴30min。加入300μl氯仿／异戊醇(24：1)充分混合约5min，12000r／m