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1、遗传HEREDITAS(Beijing)25(2):181~184,2003研究报告转基因番木瓜的抗病性及分子鉴定11112叶长明,魏祥东,陈东红,蓝崇钰,朱利民(1.中山大学基因工程教育部重点实验室生物防治国家重点实验室,广州510275;2.香港中文大学生物系,香港沙田)摘要:对T1代转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶(RP)突变体基因的两个番木瓜株系,进行了抗病性和分子生物学分析。结果表明,转基因番木瓜对PRV抗性达到高抗或免疫,目的基因RP遗传至转基因后代并在RNA水平表达,PCR可检测到CaMV35S启动子序列
2、、标记基因NPTII。关键词:转基因番木瓜;抗病性;检测中图分类号:Q812文献标识码:A文章编号:0253-9772(2003)02-0181-04AnalysesofVirusResistanceAndTransgenesforTransgenicPapaya11112YEChang-Ming,WEIXiang-Dong,CHENDong-Hong,LANChong-Yu,ZHUL-iMin(1.TheKeyLaboratoryofGeneEngineeringofTheMinistryofEducation,Th
3、eStateKeyLaboratoryofBiologicalControl,ZhongshanUniversity,Guangzhou510275,China;2.DepartmentofBiology,TheChineseUniversityofHongKang)Abstract:VirusresistanceinfieldandmolecularbiologicalcharacterizationsofthetransgeneswereanalyzedfortwolinesofT1generationoftran
4、sgenicpapayawiththereplicasemutantgenefrompapayaringspotvirus(PRV).Thetransgenicpla-ntsshowedhighlyresistantorimmuneagainstPRV.ResultsindicatedthatthetransgenesinheritedtoandexpressedatRNAlevelintheprogenies.Keywords:transgenicpapaya;virusresistance;transgenesde
5、tection番木瓜果蔬兼用,其未成熟果实富含木瓜酶,后2000年1月取转基因番木瓜T1代中抗1号和者广泛应用于食品、洗涤化妆品、制药等工业领域。中2号的种子,在中山大学温室营养钵育苗,2000番木瓜环斑病毒(papayaringspotvirus,PRV)病是年3月摩擦接种PRV,15d后观察发病情况,淘汰病番木瓜的一种世界性、毁灭性病害,长期未解决其防株。健株移栽至广州新厚德农工商联合公司磨碟沙治。美国率先将PRV的外壳蛋白(CP)导入番木瓜农场,面积2亩,200株P亩,并栽植普通番木瓜作对获得转基因抗病品系,于1
6、997年被美国FDA批准产照。于5月生长旺盛期再一次人工接种PRV,观察[1,2]业化。我们在国际上首次将PRV复制酶(RP)发病和生长状况。突变体基因(以下简称RP基因)导入番木瓜也获得1.2转基因番木瓜RP基因的分析[3,4]转基因抗病品系,经农业部农业生物基因工程安取9株转基因植株,按常规CTAB法提取番木全管理委员会审批,于2000年在广州进行了中间试瓜DNA,用合成的两段RP基因引物5c-CGAG-验,对其抗病性和有关转化基因进行了观察分析。GATCCATGGATAAGTTACACGGCAATCT-3c、5c
7、-AACATCGTGGTCAACTTCACC-3c,进行1材料与方法PCR,1.2%琼脂糖凝胶电泳检查结果。1.1转基因番木瓜的栽植从两株系中各取1株PCR阳性转基因植株,提收稿日期:2002-04-24;修回日期:2002-07-11基金项目:广州市重点攻关项目(99-Z-011-01),广东省环保局科技项目(2001-17)资助作者简介:叶长明(1962-),男,河南人,博士,副教授,专业方向:生物技术。Tel:020-84114032,E-mail:lsbrc10@zsu.edu.cn182遗传HEREDITAS
8、(Beijing)200325卷取总DNA,分别用BamHI、BamHIPKpnI消化,用GAAGAACTCGTCAAGAAG-3c,进行PCR分析。32A-P-dCTP标记的RP探针,按常规方法进行2结果与分析Southern印迹分析。按异硫氰酸胍法提取番木瓜总RNA,用无2.1转基因番木瓜生长、发病情况RNase的DNaseI
