原核表达dsRNA抗番木瓜畸形花叶病毒的研究.pdf

《原核表达dsRNA抗番木瓜畸形花叶病毒的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、热带作物学报2014，35(7)：1416—1423ChineseJournalofTropicalCrops原核表达dsRNA抗番木瓜畸形花叶病毒的研究张涛．一，沈文涛，言普z，黎小瑛，周鹏-，2I。1海南大学农学院．海南海口5702282中国热带农业科学院热带生物技术研究所．海南海口5711013中国热带农业科学院分析测试中心．海南海口571101摘要番木瓜畸形花叶病毒(Papayaleafdistortionmosaicirus．PLDMV)是一种已对番木瓜种植业构成潜在威胁的新型病害。在转基因植物备受争

2、议的背景下．利用原核表达的dsRNA来防控病毒的策略不失为一种新的选择。本文选取PLDMVcP基因全长(879bp)，运用OZ—LIC法构建了含有pdk内含子的ihpRNA结构。将其嵌入原核表达载体pSP73中．并转化RNasem缺陷型大肠杆菌M—JmlO9LacY．构建了1种能高表达dsRNA的原核表达菌株M-Jm109LacY—CP879．以终浓度为0．4mmol／LIPTG诱导后能够稳定高效的表达CP879一dsRNA。研究共设2个处理：保护性处理与治疗性处理。分别用含有CP879一dsRNA的粗提液对这

3、2个处理的番木瓜植株进行喷施处理，通过统计发病率、观察病症变化以及ELISA分析结果表明，保护性处理能有效抑制番木瓜畸形花叶病毒的侵染，主要表现为发病时间推迟和相对较低的发病率：治疗性处理植株的病毒积累量会在喷施后第3～12天内出现暂时性的降低。结果表明，保护效果优于治疗效果，若每月喷施2—3次dsRNA粗提液，有望能够有效地预防PLDMV的侵染关键词番木瓜畸形花叶病毒；原核表达；dsRNA；RNA沉默中文分类号$667．97文献标识码AdsRNAofProkaryoticExpressionforResist

4、ancetoPapayaLeafDistortionMosaicVirusZHANGTao，SHENWentao，YANPu，LIXiaoying，ZHOUPeng工1c0ofAgriculture，HainanUniversity,Haikou,Hainan571101，China2Imtit~eofTropicalBioscienceandBiotechnology,CATAS,Haikou,Hainan571101，China3Analysis＆testingcente5CATAS,H~kou,Haina

5、n571101．ChinaAbstractPapayaledistortionmosaicvirus(PLDM、7)isapotentialthreattopapayacultivation．Nowaday~transgenicplantsishighlycontrovemial，andusingtheprokaryoticexpresseddsRNAtocontroltheviruscouldbeanewchoice．Thefu11lengthofPLDMVCPgenef879bp1waschosentoco

6、nstructahairpinRNAstructurewhichcontainspdkintronbyOZ—LICmethod．AfterthecodingstructureofhairpinRNAinse~edintotheprokaryoticexpressionplasmidofpSP73．therecombinantvectorwastransformedintotheRNasem—deficientEscherichiacolstrainofM-Jm109LacY．Thenaprokaryoticex

7、pressionstrainwithhighexpressionlevelofCP879一dsRNAwassuccessfullyconstructed．namedM-Jml09LacY—CP879．TherecombinantEcolstraincouldexpressCP879一dsRNAstablywheninducedwithIPrGat0．4mmol／L．Therearetwoassaysinthisstudy：aprotectiveresistanceassayandatIlerapeuticres

8、istanceassay．Intheprotectiveassay。CP879一dsRNAwasusedtosprayontotheplantleavesbeforeinoculationofPLDMV．Thediseaseincidence，symptomchangeandELISAanalysisresultsrevealedthattheCP879一dsRNAcouldinhib