苯乙酸对胶质瘤c6细胞中c

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1、苯乙酸对胶质瘤C6细胞中c作者：黄少伟，杨朝华，李齐广，吴全理，罗大山，王光绿【摘要】目的观察诱导分化剂苯乙酸（phenylacetate，PA）对c-myc和Caspase-3表达的影响，探讨PA诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制。方法体外培养胶质瘤C6细胞，实验组给予PA浓度5.0mmol/L诱导72h，对照组不用PA，分别用免疫细胞化学检测c-myc和Caspase-3的表达，图像分析比较表达水平的差异。结果免疫细胞化学检测，两对照组和实验组中c-myc的表达分别为0.214±0.013和0.153±0.007，C

2、aspase-3的表达分别为0.149±0.004和0.206±0.033。结论PA能够下调c-myc的表达和增强Caspase-3的表达，其诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制可能与此有关。【关键词】苯乙酸酯类；神经胶质瘤；细胞凋亡Abstract:ObjectiveTostudytheeffectsofdifferentiationinducerphenylacetate(PA)ontheexpressionofc-mycandCaspase-3inratC6gliomacellsandexplorethemechan

3、ismofPAaction.MethodsC6gliomacellsentgroup,C6cellsmol/Lfor72hours.Incontrolgroup,noPAinistrated.Theexpressionofc-mycandCaspase-3munocytochemistrytechnique.Thediffererncesoftheimagingpresentationinthetycincontrolgroupandexperimentgroupycandenhancetheexpressiono

4、fCaspase-3,ightconsequentlyinduceapoptosisinC6gliomacells.Keya;apoptosis诱导分化剂苯乙酸（phenylacetate，PA）是一种苯丙氨酸的脱氨基产物，正常情况下以低浓度存在于人脑脊液和血液，能降低血浆中谷氨酰氨水平，对人体无毒副作用，1994年Samid［1］发现PA对胶质瘤有诱导分化和抑制生长作用。此外研究发现PA对子宫颈癌［2］、乳腺癌［3］和肾癌［4］等多种肿瘤也有抑制作用，PA具有很好的临床应用前景。在国外PA已进入Ⅱ期临床试验，但作

5、用机理尚未完全清楚。前期的研究发现PA能诱导胶质瘤C6细胞凋亡［5］，笔者主要研究PA对c-myc和Caspase-3表达的影响，探讨PA诱导凋亡的机制。1材料与方法1.1材料大鼠胶质瘤C6细胞（引自中国科学院上海细胞生物学研究所）；RPMI1640培养基（Gibco,美国）；苯乙酸（sigma,美国）；SABC免疫组化检测试剂盒（武汉博士德公司）；c-myc和Caspase-3一抗（兔抗大鼠，武汉博士德公司）；CO2培养箱(SANYO,日本)；倒置光学显微镜IMT-2-12型（OLYMPUS，日本）；OLYMPU

6、S采集图像系统；LaserPix图像分析系统（Bio-Rad,UK）。1.2方法1.2.1细胞培养C6细胞以5×105/ml在100ml培养瓶中单层培养，置37℃、5%CO2恒温恒湿培养箱中培养，RPMI1640培养基加入10%热灭活胎牛血清，碳酸氢钠2g/L，青霉素100u/ml，链霉素100μg/ml，取对数生长期的细胞进行实验。1.2.2免疫细胞化学检测c-myc和Caspase-3的表达将经多聚赖氨酸处理的盖玻片放入6孔板中，C6细胞以5×105/ml接种培养，24h后更换为含有PA的培养基，浓度5.0mm

7、ol/L，培养72h后取出盖玻片，PBS洗涤2次，用4%多聚甲醛缓冲液固定30min，PBS洗涤3次。按试剂盒说明进行检测操作(一抗工作浓度c-myc1∶25，Caspase-31∶100)。结果判断:c-myc和Caspase-3阳性表达均位于胞浆内，呈棕黄色。用OLYMPUS采集图像系统采集图像，LaserPix图像分析系统进行图像分析，在统一放大倍数(400倍)下测定平均光密度(meandensity，MD)，进行分析。1.3统计学处理每个实验重复5次，计量资料结果数据表示为±s，作t检验，分析用软件SAS8

8、.02完成。2结果2.1免疫细胞化学检测c-myc的表达在C6细胞中有c-myc的表达（见图1），图像分析显示MD为0.214±0.013。PA5.0mmol/L作用72h亦有c-myc的表达（见图4），胞浆黄染减弱，图像分析显示MD为0.153±0.007，两者差异有高度显著性（t=8.93，P<0.01）。2.2免疫细胞化学检测Caspase-3表