电离辐射对胶质瘤c6细胞垂体瘤转化基因表达的影响

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1、电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因表达的影响：姜平戴如飞蔡军刘宁骆慧闫志海阎超【摘要】目的探讨电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因（pituitarytumortransforminggene，PTTG）表达的影响。方法胶质瘤C6细胞分为4组（n=6）：A组（空白对照组）、B组（2Gy剂量X射线组）、C组（4Gy剂量X射线组）、D组（6Gy剂量X射线组），X射线照射后12h，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PTTGmRNA的表达,免疫细胞化学检测其蛋白表达。结果PTTGmRNA在X射线处理组均降低，随着X射线剂量的增加，其表达降低

2、越明显，A、B、C、D4组的表达分别为1.910±0.141、1.398±0.157、1.010±0.133、0.743±0.092，各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。PTTG蛋白积分光密度(integratedopticaldensity，IOD)在X射线处理组均降低，随着X射线剂量的增加，其表达降低越明显，A、B、C、D4组的IOD分别为1.840±0.089、1.395±0.139、0.893±0.125、0.597±0.104，各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论电离辐射可以剂量依赖的方式降低胶质瘤C6细

3、胞PTTGmRNA及其蛋白的表达。【关键词】胶质瘤；电离辐射；垂体瘤转化基因Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofionizingradiationontheexpressionofpituitarytumortransforminggene(PTTG)ingliomaC6cells.MethodsGliomaC6cellsRNAerasechainreaction(RT-PCR)12hoursafterX-rayirradiationandtheexpressionofPTTGproteinmu

4、nostainingassayusingstreptavidin-peroxidase(SP)method.ResultsTheexpressionofPTTGmRNAdecreasedinX-raytreatmentgroups,RNAingroupsA,B,CandDentgroups,RNAandtheproteiningliomaC6cellsinadose-responserelationship.Keya;ionizingradiation;pituitarytumortransforminggene很多实验已经证实X射线可以影响

5、众多参与肿瘤发生、发展的基因的表达，通过基因改变对肿瘤细胞周期的调控而调节肿瘤细胞的增殖和凋亡。垂体瘤转化基因（pituitarytumortransforminggene，PTTG）是一种促进肿瘤细胞生长的基因，而电离辐射对该基因有何影响，国内外均鲜见报道。本研究应用不同剂量的X射线作用于胶质瘤C6细胞，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PTTGmRNA的表达,免疫细胞化学检测其蛋白表达,探讨电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因表达的影响，为探讨放疗对肿瘤细胞增殖和凋亡的调节机制提供新的理论依据。1材料和方法1.1材料胶质瘤C6细

6、胞（中国科学院上海分院），DNTP、TaqDNA聚合酶（dT）、Oligo15、AVM逆转录酶(Promega公司)，鼠抗人PTTG单克隆抗体(SantaCruz公司)，链亲合素卵白素-过氧化物酶(streptavidin-peroxidase,SP)、DAB试剂盒(北京中山生物技术有限公司)。1．2细胞培养、X射线处理及分组胶质瘤C6细胞在含有10%新生小牛血清、青霉素1×105U/L、链霉素1×105U/LDMEM培养基中，5%CO2、37℃条件下培养。分为A、B、C、D4组（n=6）。A组（空白对照组）不进行X射线照射处理；对数生长期的

7、细胞采用医用直线加速器的6MVX射线照射，按照射剂量分为2Gy（B组）、4Gy（C组）、6Gy（D组）3个剂量组，照射野为10cm×10cm,等中心照射，照射完毕常规培养12h后进行检测。1．3RT-PCR检测PTTGmRNA的表达Trizol提取总RNA，分光光度计测定RNA的浓度和纯度。RT-PCR检测PTTGmRNA的表达，以β2-微球蛋白（β2-M）为内参照，设计PTTG、β2-M引物序列如下（上海生物工程公司合成）：PTTG引物上游5′-CTAAGGATGGGCTGAAGCTG-3′,下游5′-CAAACAGGTGGCAATTC-3

8、′，扩增长度496bp；β2-M引物上游5′-GTAAGCAGCATCATGCA-3′，下游5′-TGGAGGAACCTGGTCA-3′，扩增长度300bp。合成c