鹅膏蕈碱对c6胶质瘤细胞的毒性作用研究

《鹅膏蕈碱对c6胶质瘤细胞的毒性作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果鹅膏蕈碱对C6胶质瘤细胞的毒性作用研究作者：毕晓颖伍凤平李亚梅郭杰【摘要】目的比较不同浓度的鹅膏蕈碱对C6胶质瘤细胞毒性作用。方法采用体外培养方法。结果C6胶质瘤细胞在不同浓度的鹅膏蕈碱分别作用12和2h后呈无规律改变；但4h后，随着浓度的增强，C6胶质瘤细胞的增殖能力越来越差，细胞坏死也随之增多。结论鹅膏蕈碱对C6胶质瘤细胞作用一定的时间后，对C6胶质瘤细胞的抑制作用随

2、浓度的增加而增加，呈浓度依赖性。【关键词】鹅膏蕈碱；C6胶质瘤细胞；毒性鹅膏蕈碱是真菌门，担子菌衙门，担子菌纲，伞菌目，鹅膏菌科，鹅膏菌属中一类真菌的总称，是一种含有几种特殊氨基酸的环八肽〔1〕，它能够与RNA聚合酶2紧密结合，阻断RNA延长步骤，使细胞内mRNA合成减少〔1～4〕，从而导致蛋白质合成减少，引起细胞死亡，其化学性质很稳定，耐高温。它是一种无色物质，易溶于甲醇，液体氨，吡啶，也溶于水〔5〕。本实验拟通过细胞形态学和MMT法检测细胞的存活数，探讨鹅膏蕈碱对C6胶质瘤细胞的毒性作用。1材料与方

3、法材料与试剂课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果无菌实验设备；CO2孵箱；倒置显微镜；96孔培养板。C6胶质瘤细胞株购于ATCC(Rockv,MD)。IMDM培养基购于Gibco公司。含10%胎牛血清。鹅膏蕈碱和MTT购于Sigma公司。方法采用MTT测定方法，活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源

4、性MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，结晶物形成的量与细胞数成正比〔6〕。取4块96孔培养板每孔分别加入100μl含1×103胶质瘤细胞的细胞悬液，增殖组同时加入100μl不同浓度鹅膏蕈碱于前9列孔中，第10列孔不加，培养d，用倒置显微镜观察细胞生长情况，继续培养4h后加MTT。MTT组板同样地加入不同浓度的鹅膏蕈碱，继续培养，然后分别于培养12、、

5、48、7h后加入MTT。测定各孔吸光光度值，计算细胞存活数。统计学分析采用随机区组设计的方差分析。结果.1形态学改变课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果培养d后，用倒置显微镜观察培养板C6胶质瘤细胞呈多突起形状，与培养前相比数量明显增多，贴壁情况好；鹅膏蕈碱作用于细胞1h后，细胞出现萎缩现象，但不

6、同浓度之间没有明显的区别；作用2h后萎缩现象加重，有的甚至已经坏死，但萎缩和坏死的程度并未随浓度增大而增强；48、7h后有明显坏死，且具有浓度依赖倾向。增殖组培养板由于细胞培养加入鹅膏蕈碱，浓度为100μg/μl作用7h细胞几乎无增殖，原有细胞大多已坏死且不贴壁；随着浓度降低，μg/μl作用7h时细胞部分萎缩坏死，有增殖贴壁现象；浓度为μg/μl作用7h时细胞无坏死，细胞密度大增殖旺盛。.2两组存活细胞百分数比较C6胶质瘤细胞存活数与不同浓度鹅膏蕈碱作用2h前无明显变化，不同浓度鹅膏蕈碱作用4h后，随着

7、浓度增加，C6胶质瘤细胞存活数也随之减少(P＜,P＜)，且有剂量依赖性(见表1)。表1C6胶质瘤细胞在不同浓度鹅膏蕈碱的作用下各个时间点的存活细胞百分数讨论鹅膏多肽毒素在生命科学的应用主要表现在5个方面：真核生物mRNA合成的专一性抑制剂;基因的组织结构和细胞定位;基因的表达和调控;肿瘤和病毒的研究;细胞结构与功能〔8〕。本实验在鹅膏蕈碱抗肿瘤方面做了部分研究。张志光等人在比较鹅膏毒素对真核生物RNA聚合酶Ⅱ的抑制作用时，发现用含有鹅膏蕈碱毒素的粗提取液培养新鲜绿豆，绿豆生长一定时间后就不再生长，说明鹅

8、膏蕈碱对新鲜绿豆的生长有抑制作用,且这种抑制作用随着鹅膏蕈碱毒素含量的增多而明显〔6〕。对人类而言,鹅膏蕈碱是有毒蘑菇中的一类慢作用毒素,误食后8～10课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果h才会有反应,先是剧烈的上吐下泻,之后有d左右