高效液相色谱法测定鸭掌散不同煎液中甘草酸的含量及体外抗菌作用比较论文

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1、高效液相色谱法测定鸭掌散不同煎液中甘草酸的含量及体外抗菌作用比较论文叶世芸冯华武孔云靳凤云贺祝英田维毅梁光义【摘要】目的考察用合煎（传统汤剂）、分煎（配方颗粒汤剂）方法制备的鸭掌散汤剂中甘草酸含量的变化，并比较其体外抗菌作用。方法①建立高效液相色谱方法，采用DiamonislC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，甲醇-0.2mol/L醋酸胺溶液-冰醋酸（67∶33∶1）为流动相，流速1ml/min，检测波长250nm。分析鸭掌散合煎液和分煎液样品中甘草酸的含量变化。②采用稀释法体外测试鸭掌散不同煎液对常见菌种的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结

2、果①鸭掌散分煎液中甘草酸的平均含量大于合煎液中甘草酸的平均含量。②鸭掌散分煎液对福氏痢疾杆菌有抑菌作用，而合煎液没有；合煎液对白色葡萄球菌、黄曲霉菌的抑菌作用大于分煎液。结论与传统汤剂比较.freelonislC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-0.2mol/L醋酸胺溶液-冰醋酸（67∶33∶1）；流速1ml/min；检测波长为250nm；柱温25℃［1］。2.1.2溶液的制备及测定对照品溶液的制备：精密称取甘草酸单铵盐对照品10mg，置50ml量瓶中，用流动相溶解并定容，即得甘草酸对照品溶液（每毫升甘草酸单铵盐对照品0.2392mg，折合甘草

3、酸为0.221mg）［1］，备用。合煎液样品溶液的制备(传统汤剂，使用传统煎煮法)：称取药材饮片，麻黄15.0g，甘草12.0g，白果10个，加8倍量的水煎煮，保持微沸30min，倒出煎液；药渣再加8倍量的水煎煮两次，20min/次，合并3次煎液，减压干燥成干粉。称取相当原药材处方量的干粉，置50ml量瓶中，用开水溶解定容至刻度冷至室温。精密吸取2ml，置25ml容量瓶中，加流动相约20ml，超声处理（功率250in，取出，放冷，加流动相定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液用的微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。分煎液样品溶液的制备（配方颗粒汤剂，煎煮方法由贵州宏宇药业

4、有限公司提供）：分别称取上述量的药材麻黄、甘草和白果。麻黄加10倍量的水煎煮保持微沸40min，倒出煎液，药渣再加6倍量的水煎煮40min；甘草加10倍量的水煎煮保持微沸60min，倒出煎液，药渣再加8倍量的水煎煮60min；白果加10倍量的水煎煮保持微沸60min，倒出煎液，药渣再加8倍量的水煎煮40min；分别合并各药材的两次煎液，减压干燥成干粉。将各药材干粉混合均匀，称取相当原药材处方量的干粉，同合煎液样品溶液制备法制得分煎液样品溶液。阴性对照液的制备：再分别按上法制备不含甘草的合煎液、分煎液的阴性对照液。2.1.3线性关系考察标准曲线的绘制：分别精密称取甘草

5、酸单铵盐对照品，用流动相稀释配制浓度分别为0.0442，0.0882，0.1324，0.1762，0.2211，0.2664mg/ml的甘草酸单铵盐系列对照品溶液，精密吸取甘草酸单铵盐系列对照品溶液10μl，按上述色谱条件依次测定峰面积，以峰面积积分值（A）对进样量（C）进行线性回归，得回归方程为A=710.0330C+2.9668，r=0.9999。甘草酸在0.442～2.664μg间浓度与峰面积的线性关系良好。2.1.4精密度实验精密吸取同一对照品溶液10μl，重复进样6次，测定相应峰面积，RSD=0.2%。2.1.5稳定性实验取供试品溶液，分别于0，2，4，6

6、，8h测定，合煎液RSD=1.1%；分煎液RSD=1.1%，表明两种供试品溶液在8h内稳定。2.1.6重复性实验分别取同一样品干粉各6份，按相应样品液处理方法制备及测试条件测定，结果合煎液RSD=0.4%，分煎液RSD=1.2%。2.1.7回收率实验精密称取已知含量的合煎液样品和分煎液样品干粉各9份，分别加入3个不同浓度的甘草酸单铵盐对照品，按上述条件各制备9份供试液，稀释到25倍进行加样回收，过0.45μm滤膜，并按色谱条件项下进样，同法测定。结果见表1～2。表1分煎汤剂甘草酸加样回收测定结果表2合煎汤剂甘草酸加样回收测定结果2.1.8样品含量测定精密吸取同体积的

7、合煎液、分煎液，按上法分别平行测定5次，求平均样品含量。甘草酸在鸭掌散每个复方中的含量分别为合煎105.22mg，分煎116.03mg。2.2体外抗菌实验2.2.1实验菌种、培养基与仪器金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、白色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、伤寒杆菌、福氏痢疾杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、青霉菌，由贵阳中医学院微生物检测室提供。普通肉汤培养基、普通营养琼脂、血琼脂平板、沙氏琼脂培养基、沙氏液体培养基等。Ⅱ级生物安全柜、生化培养箱。2.2.2方法及结果菌株及药物的处理：将上述细菌菌株分别用相应培养基常规转种培养24h后，再用液体传代培养6h，然