高效液相色谱法测定解毒利尿颗粒中甘草酸含量

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1、高效液相色谱法测定解毒利尿颗粒中甘草酸含量【关键词】高效液相色谱法;解毒利尿颗粒;甘草酸　　Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofglycyrrhizicacidinJieduLiniaogranulesbyHPLC.MethodsDiamonsilTMC18column(5μm,250mm×4.6mm)ethol-(0.02mol·L-1ammoniumacetate-glacialaceticacid(33∶1))(64∶36)asmobilephase.Theflol·min-

2、1，thecolumntemperature.ResultsThecalibrationcurveethodisconvenient,stableandaccurate,soitcanbeusedfordeterminationofglycyrrhizicacidinJieduLiniaogranules.　　Key32色谱工作站;KQ-250DB数控型超声波清洗器(昆山市超声仪器公司);METTERToledoAG1351/10万电子分析天平(瑞士METTER公司)。　　甘草酸铵(中国药品生物制品检定所，批号：110731-200511)。解毒利尿颗

3、粒样品(自制，批号：20060811，20060813，20060816)。甲醇为色谱纯，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm，5μm);流动相为甲醇-[0.02mol·L-1醋酸铵-冰醋酸(33∶1)](64∶36);检测波长250nm;流速1.0ml·min-1;柱温30℃。进样量10μl。根据试验结果，考虑到仪器、色谱柱、流动相的配制和温度等系统因素的影响，规定理论板数按甘草酸峰计算，应不低于2000。　　2.2对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷干燥器中干

4、燥至恒重的甘草酸铵对照品1.25mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每毫升含甘草酸铵50μg，相当于甘草酸48.975μg)。　　2.3供试品溶液的制备取本品(批号20060811)5袋，粉碎，称取0.5g，精密称定，置100ml的量瓶中，加40%甲醇稀释至刻度，超声提取40min，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。　　2.4阴性供试品溶液的制备按解毒利尿颗粒的处方，取除甘草提取物外的其他辅料依照本品制备工艺制备阴性样品制剂。取阴性样品制剂0.5g，精密称取，按供试品溶液的制备方法制得阴性供试品溶液。　　2.5系统适应性试

5、验按供试品测定方法进行测定。结果表明，甘草酸对照品与解毒利尿颗粒中甘草酸的保留时间一致，阴性供试品溶液在甘草酸色谱峰位置处无相应的峰出现，同时与其他组分分离完全，分离度为2.04，理论板数按甘草酸峰计算应不低于2000。结果见图1。　　2.6线性关系考察分别精密自动吸取此溶液3，5，8，10，13，15μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以进样量X(μg)对峰面积的积分值Y进行线性回归，计算回归方程：Y=784579X-19762(r=0.9998)，试验结果表明甘草酸铵进样量在0.15～0.75μg范围内线性关系良好。　　A甘草酸铵对照

6、品B供试品C阴性对照1.甘草酸　　2.9重复性实验取6份样品(批号：20060811)，同前法测定样品中甘草酸的含量，RSD为2.45%，表明重现性良好。　　2.10加样回收实验取已知准确含量的样品(批号：20060811，含量为125mg/袋)6份，每份0.25g，精密称定，置100ml量瓶中。精密加入甘草酸铵对照品(2.483mg)，按样品测定方法进行测定，结果平均回收率为98.99%，RSD为1.74%，加样回收率均符合要求。结果见表1表1加样回收率实验结果　　2.11样品含量测定按上述方法，测定3批解毒利尿颗粒中甘草酸的含量。结果见表2表2

7、样品每袋含量测定结果　　3讨论　　3.1提取方法的确定文献报道，甘草酸的提取方法有溶剂提取法[6]、微波法[7]及超临界CO2流体萃取法[8]等。溶剂提取法提取时间长，杂质溶出率较高，工作量大;微波法虽提取时间短，提取率高，但是杂质溶出率高;超临界CO2流体萃取法快速、高效、选择性专一且无污染，但存在操作压强大，夹带剂浓度高，萃取时间较长，仪器设备昂贵等不足。超声提取法具有方便、快捷、提取效率高等优点，因此本试验采用此法对甘草酸进行提取。　　3.2提取时间的确定取本品超声处理不同时间(20，40，60，80，100min)，分别测定其峰面积，结果发现超

8、声提取40min后，随提取时间延长峰面积不再增加。因此本试验中提取时间定为40min。　　3.