高效液相色谱法测定贵州不同产地半夏药材中鸟苷和腺苷的含量论文

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1、高效液相色谱法测定贵州不同产地半夏药材中鸟苷和腺苷的含量论文赵杨，靳凤云，伍庆，邹晶，刘冬黔【关键词】高效液相色谱法；,,半夏；,,鸟苷；,,腺苷摘要：目的研究以HPLC同时测定贵州不同产地半夏药材中鸟苷、腺苷含量的方法。方法采用DiamonsilC18柱(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇水(15∶85)为流动相，流速0.7mlmin-1.freel，柱温25℃。结果鸟苷在0.048～0.480μg范围内线性关系良好，r=0.9999，腺苷在0.045～0.449μg范围内线性关系良好，r=0.9998。加样回收率(n=9)的RSD：鸟

2、苷为2.94%，腺苷为2.06%。结论该法操作简便，结果可靠，重现性好，可作为半夏药材的质量控制方法之一。关键词：高效液相色谱法；半夏；鸟苷；腺苷Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminationofguanosineandadenosineinRhizomaPinelliaternatefromdifferentdistrictsinGuizhou.MethodsADiamonsilC18column(4.6mm×250mm，5μm)obilephaseethanol-lmin-

3、1，λ=260nm，andthecolumntemperatureethodhasgoodreproducibility.ItcanbeusedforqualitycontrolofRhizomaPinelliaternate.KeyonsilC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为甲醇-水(15：85)；检测波长λ=260nm；柱温25℃，流速0.7mlmin-1。2.2系统适用性实验按样品含量测定项下方法制备供试品溶液，取该溶液10μl，注入高效液相色谱仪，鸟苷和腺苷的保留时间分别为8.833min及17.918min。理论塔板

4、数以鸟苷计不低于2000，鸟苷和腺苷与相邻未知色谱峰的分离度均大于1.5(见图1)。2.3线性关系考察分别精密称取干燥至恒重的鸟苷、腺苷对照品，用30%MeOH制成浓度分别为0.600，0.561mgml-1的对照品储备液Ⅰ，Ⅱ。分别精密吸取对照品储备液Ⅰ，Ⅱ各2ml，至50ml容量瓶中，用30%MeOH定容至刻度制成浓度24.00，22.44μgml-1的混合对照品溶液。精密吸取混合对照品溶液2，5，8，11，14，17，20μl进样，于260nm处测定峰面积。以进样量(μg)为横坐标(x)，以峰面积为纵坐标(y)计算回归方程。结果：鸟苷的回

5、归方程为y=3532.6x-3.5126，相关系数r=0.9999，线性范围为0.048～0.480μg；腺苷的回归方程为y=4023.7x-6.7459，相关系数r=0.9998，线性范围为0.045～0.449μg。2.4精密度实验精密吸取混合对照品溶液10μl，连续进样6次，以峰面积计算RSD（%），鸟苷和腺苷峰面积的RSD分别为0.29%和0.14%。结果见图1。1.鸟苷2.腺苷图1对照品(a)及贵州河镇地区半夏药材(b)色谱图（略）2.5重复性实验精密称取河镇地区半夏药材(粉碎,过60目筛)6份，按样品含量测定项下方法制备供试品溶液，

6、按样品的含量测定法测定，结果鸟苷平均含量为80.365μgg-1，RSD=1.11%；腺苷平均含量为91.355μgg-1,RSD=0.77%。2.6稳定性实验精密称取河镇地区半夏药材(粉碎,过60目筛)1g，按样品含量测定项下方法制备供试品溶液，按样品含量测定法，分别在0，2，4，6，8，10h进样测定,结果鸟苷平均含量为83.833μgg-1，RSD=0.85%；腺苷平均含量为92.217μgg-1，RSD=0.25%。2.7加样回收率实验精密称取河镇地区半夏药材（含鸟苷82.099μgg-1，腺苷91.786μgg-1）1g(粉碎,过60

7、目筛),.freell锥形瓶中，精密加入30%MeOH30ml，称重，超声提取30min，冷却后补至原重，滤过，滤液过0.45μm微孔滤膜作为供试品溶液，进样10μl，以外标法计算含量。结果见表1。表1样品含量测定结果（略）3讨论3.1流动相的选择本实验比较了甲醇水、乙腈水、甲醇酸水、乙腈-酸水系统对样品中鸟苷、腺苷分离度、峰形的影响，结果发现采用甲醇水(15∶85)洗脱时鸟苷、腺苷分离效果和峰形最好。3.2提取方法的比较本实验比较了超声、回流、索氏提取等方法对半夏药材中鸟苷、腺苷提取效率的影响，结果超声提取法既省时又方便，而且提取效果最好。3

8、.3提取溶剂的选择本实验比较了用不同浓度的甲醇、酸水、水作为提取溶剂，结果以30%甲醇提取效果最好。本文结果表明，贵州不同产地半夏药材中鸟苷和腺苷含量