反相高效液相色谱法测定不同产地无患子药材中常春藤皂苷元的含量

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1、反相高效液相色谱法测定不同产地无患子药材中常春藤皂苷元的含量：何宇新，马育彪，李玲，向文良，吴金伟【摘要】　　目的建立高效液相色谱法测定酸水解后无患子药材中常春藤皂苷元的含量。方法采用盐酸加热回流水解，氯仿索氏回流提取皂苷元。结果常春藤皂苷元的线性范围为10.04～60.24μg，平均回收率为99.34％，RSD为1.25％。结论所建立的高效液相色谱（HPLC）方法重复性好，专属性强，为无患子药材质量控制标准的建立提供科学依据。【关键词】无患子；反相高效液相色谱（RP-HPLC）；常春藤皂苷元　　无患子属无患子科无患子，又名油患子、肥珠子等，主要含

2、无患子皂苷、脂肪油、蛋白质，具有清热、祛痰、消积、杀虫等功效，用于治疗喉痹肿痛、咳喘、食滞、白带、疳积、疮癣、肿毒等证。无患子果皮中所含的无患子皂苷是一种天然温和型非离子表面活性物质，除具有较好的起泡、去污性能外，还具有抗菌、消炎、抗病毒、杀虫等多种生物活性。现在对于无患子药材含量测定方法都是采用紫外分光光度法测定其总皂苷的含量，本研究在参考其它药材常春藤皂苷元研究基础上［1，2］，建立了无患子药材中常春藤皂苷元的含量测定方法，为无患子药材的质量控制提供了有效方法和检验依据。　　1仪器与样品　　仪器：岛津LC-20型高效液相色谱仪，主要组成部分为L

3、C-20AB型泵、SIL-20AC自动进样器、SPD-M20A紫外检测器。Tedia色谱纯甲醇，水为超纯水，甲醇、正丁醇、三氯甲烷、盐酸均为分析纯。　　常春藤皂苷元对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：111733-200603）；无患子（产地采集），经西华大学杨文宇讲师鉴定为无患子科植物无患子SapindusmukorossiGaerth.的种子。　　2方法与结果　　2.1含量测定　　2.1.1色谱条件　　色谱柱为KormasilC18（4.6mm×250mm，5μm）柱；柱温30℃；检测波长210nm，流速1.0ml·min-1。　　2.1

4、.2流动相的选择考察常春藤皂苷元在KromasilC18柱、不同流动相中的各参数，结果以乙腈-水（85∶15）条件下常春藤皂苷元的峰形良好，可作为流动相。　　2.1.3对照品溶液的制备　　精密称取经40℃减压干燥至恒重的常春藤皂苷元对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.5mg的对照品溶液，即得。　　2.1.4供试品溶液的制备取无患子药材细粉（80目）2g，精密称定，加甲醇50ml，超声处理（功率250in，滤过，残渣用甲醇适量洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加水10ml溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml合并提取液，蒸干，残渣加甲醇20m

5、l，盐酸2ml加热水解5h，水解物加水10ml，用三氯甲烷振摇提取两次，每次20ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并定量转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　　2.1.5测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。　　2.2方法学考察　　2.2.1线性关系考察　　分别精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10，12μl注入液相色谱仪，测定峰面积值。结果对照品峰面积Y与其进样量X（μg）之间呈良好的线性关系，常春藤皂苷元线性范围为10.04～60.24μg，回归方程为：Y=1.09

6、×105X+5.45×103，r=0.9999。　　2.2.2精密度实验精密吸取供试品溶液连续进样5次，记录峰面积积分值。结果常春藤皂苷元的RSD为0.62％。　　2.2.3稳定性实验精密吸取供试品溶液，分别于0、4、8、12h进样，记录峰面积积分值，常春藤皂苷元的RSD为0.86％，结果表明供试品溶液在12h内稳定。　　2.2.4重复性实验取供试品5份，分别按“2.1”项下方法操作并测定含量，常春藤皂苷元含量的平均值为15.2mg·g-1，RSD为1.32％。　　2.2.5回收率实验采用加样回收法，精密称取已知常春藤皂苷元总含量的供试品5份，分别

7、精密加入常春藤皂苷元对照品适量，按“2.1”方法测定，计算，常春藤皂苷元的平均回收率为99.34％，RSD为1.25％。　　2.2.6样品含量测定按“2.1”项下方法操作并测定含量，结果见表1。HPLC图谱见图1。表1无患子中常春藤皂苷元的含量测定结果（略）　　3讨论　　无患子中含有较多的皂苷类成分，目前文献报道［3］其药材的含量测定方法基本都是以香草醛-冰醋酸-高氯酸为显色体系，采用分光光度法测定无患子总皂苷含量，为了更好地控制无患子药材的质量，在其它药材常春藤含量测定基础上，在国内首次建立无患子药材HPLC含量测定方法，该方法操作简便，重现性高

8、，是控制药材质量的有效方法。　　通过对12个批次药材的含量测定，发现除个别批次含量测定结果差异较大外，大多数含量均为1%～