反相高效液相色谱法测定不同产地无患子药材中常春藤皂苷元的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定不同产地无患子药材中常春藤皂苷元的含量论文.freelukorossiGaerth.的种子。2方法与结果2.1含量测定2.1.1色谱条件色谱柱为KormasilC18（4.6mm×250mm，5μm）柱；柱温30℃；检测波长210nm，流速1.0ml·min-1。2.1.2流动相的选择考察常春藤皂苷元在KromasilC18柱、不同流动相中的各参数，结果以乙腈-水（85∶15）条件下常春藤皂苷元的峰形良好，可作为流动相。2.1.3对照品溶液的制备精密称取经40℃减压干燥至恒重的常春藤皂苷元对

2、照品适量，加甲醇制成每毫升含0.5mg的对照品溶液，即得。2.1.4供试品溶液的制备取无患子药材细粉（80目）2g，精密称定，加甲醇50ml，超声处理（功率250in，滤过，残渣用甲醇适量洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加水10ml溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml合并提取液，蒸干，残渣加甲醇20ml，盐酸2ml加热水解5h，水解物加水10ml，用三氯甲烷振摇提取两次，每次20ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并定量转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.1.

3、5测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。2.2方法学考察2.2.1线性关系考察分别精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10，12μl注入液相色谱仪，测定峰面积值。结果对照品峰面积Y与其进样量X（μg）之间呈良好的线性关系，常春藤皂苷元线性范围为10.04～60.24μg，回归方程为：Y=1.09×105X+5.45×103，r=0.9999。2.2.2精密度实验精密吸取供试品溶液连续进样5次，记录峰面积积分值。结果常春藤皂苷元的RSD为0.62％。2.2.3稳定性实验精密吸

4、取供试品溶液，分别于0、4、8、12h进样，记录峰面积积分值，常春藤皂苷元的RSD为0.86％，结果表明供试品溶液在12h内稳定。2.2.4重复性实验取供试品5份，分别按“2.1”项下方法操作并测定含量，常春藤皂苷元含量的平均值为15.2mg·g-1，RSD为1.32％。2.2.5回收率实验采用加样回收法，精密称取已知常春藤皂苷元总含量的供试品5份，分别精密加入常春藤皂苷元对照品适量，按“2.1”方法测定，计算，常春藤皂苷元的平均回收率为99.34％，RSD为1.25％。2.2.6样品含量测定按“2.1”项下方法

5、操作并测定含量，结果见表1。HPLC图谱见图1。表1无患子中常春藤皂苷元的含量测定结果（略）3讨论无患子中含有较多的皂苷类成分，目前文献报道［3］其药材的含量测定方法基本都是以香草醛-冰醋酸-高氯酸为显色体系，采用分光光度法测定无患子总皂苷含量，为了更好地控制无患子药材的质量，在其它药材常春藤含量测定基础上，在国内首次建立无患子药材HPLC含量测定方法，该方法操作简便，重现性高，是控制药材质量的有效方法。通过对12个批次药材的含量测定，发现除个别批次含量测定结果差异较大外，大多数含量均为1%～2%，因此本研究选取

6、了常春藤皂苷元作为药材含量测定的指标具有实际意义。在研究过程中，对皂苷水解用酸以及浓度进行了选择。选定以2mol·L-1硫酸和浓盐酸对无患子中的三萜皂苷进行水解，结果以后者效果较好。同时，对水解时间也进行了考察，结果表明5h即可水解完全。【