高效液相法测定不同产地柴胡药材中柴胡皂苷a、d的含量论文

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1、高效液相法测定不同产地柴胡药材中柴胡皂苷a、d的含量论文【摘要】［目的］建立一个HPLC方法，对国内13个不同产地柴胡样品中的柴胡皂苷a、d进行含量测定。［方法］色谱柱：YMCPackODSAC18(250×46mm，5μm)，流动相乙腈－水（43∶57），检测波长：203nm。［结果］柴胡皂苷a、d的线性回归方程分别为Ya=1223×106X-22498×105(r=09999)、Yd=2093×106X-47862×105(r=09998)，平均加样回收率分别为9813%、9799

2、%。［结论］本研究建立的柴胡皂苷a、d含量测定方法简便易行，结果准确、可靠，便于对柴胡药材进行质量控制。【关键词】柴胡柴胡皂苷a、dHPLCDeterminationofSaikosaponina.freelDifferentAreasbyHPLCAbstract：［Objective］TodevelopamethodusingHPLCfordeterminationcontentofsaikosaponinaandsaikosaponindofRadixBupleurifromdifferentarea

3、s.［Method］Column：YMCPackODSAC18(250×46mm，5μm)，mobilephase:acetonitrile.［Results］Theregressioneguationsofsaikosaponinaandsaikosaponindethodissimplyandsuitabletocontrolquantitativeofradixbupleurum.Key；saikosaponina,d;HPLC柴胡为伞形科植物柴胡(BupleurumChinenseDC.)或

4、狭叶柴胡(BupleurumscorzonerifoliumCPackODSAC18柱(250×46mm，5μm)；流动相为乙腈－水（43∶57）；流速：12mL/min；检测波长为203nm；柱温为室温。在此色谱条件下，柴胡药材中柴胡皂苷a、d的保留时间为626min、1453min见色谱图1。22对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷a对照品521mg，柴胡皂苷d对照品620mg，置250mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得，避光冷藏，备用。23供试品溶液的制备精密称取柴胡药

5、材粉末100g置锥形瓶中，加入100mL5%氨水甲醇溶液，称重，70℃水浴加热回流4h，放冷，补足减失重量，溶液转移至离心管中，4000r/min离心10分钟，取上清液25mL，水浴挥干，残渣加适量甲醇溶解，并定容至5mL，过045μm滤膜，避光冷藏，备用。24标准曲线的制备精密吸取标准溶液2、4、6、8、10μL，以峰面积积分值对进样量进行回归处理，得到回归方程a：Y=1223×106X-22498×105(r=09999)表明柴胡皂苷a在（0416μg～208μg）范围内线性关系良好，

6、d：Y=2093×106X-47862×105(r=09998)表明柴胡皂苷d在（0496μg～248μg）范围内线性关系良好。图1对照品（A）和样品（B）HPLC图(略)Fig.1HPLCChromatogramsofreferencesubstance（A）andFructusAurantii（B）25精密度试验精密吸取对照品溶液6μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，重复进样5次，结果柴胡皂苷aRSD为256%，柴胡皂苷dRSD为263%，表明本法精密度良好。26稳定性试验取同一供试品

7、溶液，分别在0h、1h、3h、6h、12h、18h、24h、48h、72h各进样10μL，测定峰面积，结果柴胡皂苷aRSD为111%，柴胡皂苷dRSD为095%，表明供试品溶液室温下放置72h基本稳定。27重复性试验按供试品溶液制备方法平行制备6份，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定相应峰面积，测得柴胡皂苷a质量分数RSD为150%；柴胡皂苷d质量分数RSD为172%，表明本法重复性良好。28加样回收率试验：分别称取13号柴胡药材粗粉04g、05g、06g，各精密加入70、9

8、0、105ml对照品溶液，平行3份，按供试品溶液制备项下制备，并按上述色谱条件测定，计算回收率，结果柴胡皂苷a的平均回收率为9813％，RSD为231%（n＝9），柴胡皂苷d平均回收率为9799％，RSD为281%（n＝9）。29样品的测定分别取不同产地的柴胡药材，按供试品溶液制备方法制备，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，按外标法计算样品含量，结果见表1。色谱图见图1。表1不同产地柴胡药材中柴胡皂苷a、d含量