高效液相色谱法测定北柴胡不同部位柴胡皂苷a、c、d含量

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1、高效液相色谱法测定北柴胡不同部位柴胡C、d含量【摘要】目的探讨高效液相色谱（HPLC）法测定北柴胡不同部位柴胡皂昔a、c、d含量的价值。方法采用高效液相色谱分析仪，在25°C柱温、1.OmL/min流速、210nm波长及以等比的乙睛和水作为流动相的条件下，测定北柴胡的侧根、主根和皮部三个部位的皂昔a、c、d的含量。结果北柴胡侧根的柴胡皂昔含量最高，明显高于皮部和主根的皂昔含量（P〈0.01）；皮部的皂昔含量明显高于主根的皂昔含量（P<0.01）o在三种柴胡皂昔中以柴胡皂昔c的含量最高。结论北柴胡柴胡皂昔以侧根的含量最高，北柴胡含侧根越多，药材质量越佳。【关键词】高效液相色谱法；北柴胡

2、；柴胡皂昔；a、c、d含量柴胡是常用中药，其主要的功效是保肝解热等，主要的药理活性成分是柴胡皂昔。在柴胡皂昔中最主要的3种柴胡皂昔分别是柴胡皂昔a,柴胡皂昔c和柴胡皂昔d。北柴胡以根部入药，是柴胡主要品种之一。本文采用HPLC技术对北柴胡不同部位柴胡皂昔a、c、d含量进行了测定，现报告如下。1仪器与试药1.1仪器日本岛津公司的高效液相色谱仪（LC-10Atvp）,配套的SPD-lOAtvp紫外检测器；KQ-500DE超声波仪（由昆山市超声仪器有限公司生产）；SHZ-IIID型循环水真空泵（由上海亚荣生化仪器厂生产）。1.2试药柴胡皂昔a、c、d的标准对照品（由上海医药工业研究院提供）

3、；甲醇（色谱纯）、乙睛（色谱纯）以及氨水（分析纯）；北柴胡原药材（由广州药材公司提供，批号为20120115）o2方法与结果2.1色谱条件采用C18色谱柱（4.6mmX250mm,5um）,流动相：乙騰：水是（50：50）,检测波长：210nm；流速是l.Oml/mino柱温：室温。进样量：20卩1。2.2对照品溶液的制备分别取柴胡皂昔a、c、d的标准对照品适量，精密称定，置容量瓶中加入乙醇制成分别含柴胡皂昔a、c、d的对照品溶液浓度依次为0.502mg/ml.0.404mg/ml、0.412mg/ml备用。2.3供试品溶液的制备取柴胡原植物药材的根部切碎成粉末状，取根部的不同部位分

4、别是侧根、主根和皮部，将其研碎后过40目筛。各精密称量2g于50ml的量瓶中，加入5%的氨水-乙醇溶液，作为提取剂，先润湿药材表面后在定容至刻度，静置lho然后采用超声提取lh。得到回流冷凝液后，在使用正丁醇提取3次，将其静止后，在取上清液，再次过滤离心取上清液lOinlo挥干溶剂后，加入甲醇将残留渣进行复溶，定容至2ml的容量瓶中。再将样品用0.45Um的滤膜过滤，即可测定。2.4线性关系考察取柴胡皂昔a.c、d的标准对照品各5n)g置于5ml的容量瓶中，用0.5ml甲醇溶解后稀释分别至1、2、4、6、8、10ml刻度。滤过0.45m的微孔滤膜后分别进样。进样量为20111。以相色

5、谱的峰面积为纵坐标(Y)、对照品的浓度为横坐标(X)绘制标准曲线，进行回归分析处理，得到的线性方程。柴胡皂昔a、c、d的回归线性方程为Y二3.23X105X+3.92X105(r=0.9971)对照品的浓度为2ug•ml-1；线性范围为0.53Ug-9.8ngoY=3.10X105X-8.25X105(r=0.9998)对照品的浓度为4ug；线性范围为0.16ug-8.9ngoY=3.77X105X+4.12X105(r=0.9978)对照品的浓度为6ng,线性范围为0.34ug-11.0ugo2.5精密度实验分别吸取柴胡皂昔a、c、d的标准对照液20Hl进样，分别各重复进样5次，记

6、录峰面积，相对应的RSD值分别为1.3%.1.6%.1.2%o说明该含量测定系统的精密度良好。2.6稳定性实验取供试品溶液(侧根)分别在1、2、4、8、12、16、24h重复进行测定，记录峰面积，得到3种皂昔的RSD分别是3.9%、4.1%、4.6%,说明供试液在24h内测定结果稳定。2.7重复性实验取同一批药材(侧根)样品3份，每份0.5g按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，测定含量，柴胡皂昔a、c、d的RSD分别是2.2%、1.4%、1.9%。2.8回收率实验取已知三个部位的柴胡皂昔a、c、d粗粉约0.5g,每个部位为3份，并对每份加入标准溶液各lml,各进样3次。得到三个部位

7、的柴胡皂昔a、c、d的加样回收率。侧根的回收率为92.9%(RSD=2.4%),93.2%(RSD=3.15%)和93.3%(RSD=2.11%)；主根的回收率分别是91.2%(RSD二1.22%),91.6%(RSD=1.63%)和92.2%(RSD=2.42%)。皮部的回收率分别为92.2%(RSD=3.11%),94.2%(RSD=3.62%)和91.2%(2.15%)。2.9样品测定3个部位的柴胡皂昔a、c、d样品的含量如下表显示。根据上表可以看出