高效液相色谱法测定不同产地的夏枯草中熊果酸含量论文

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1、高效液相色谱法测定不同产地的夏枯草中熊果酸含量论文孙乙铭，徐建中，王志安，俞旭平【摘要】目的建立夏枯草的高效液相色谱法（HPLC）的分析方法，研究不同产地夏枯草中熊果酸的含量差异。方法色谱柱为迪马钻石DiamonsilC18分析柱(4．6mm×250mm×5μm)；流动相为0．04mol／L磷酸二氢钠∶乙腈(体积比为20∶80)；检测波长210nm；柱温35℃。结果不同产地资源的夏枯草药材中熊果酸含量有明显的差异,.freelonsilC18分析柱(4．6mm×250mm×5μm)；流动相为0.04mol/L

2、磷酸二氢钠（用5%磷酸调节pH至2.80）∶乙腈(体积比为20∶80)；流速1.0ml/min；检测波长210nm；柱温35℃；进样量20μl。2.2样品液的制备2.2.1标准溶液的配制称取熊果酸标准样品2.57mg，置于25ml容量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，得含熊果酸0.1028mg／ml的标准溶液。2.2.2供试品溶液的制备称取样品粉末（过2号筛）2g，精密称定，置索氏提取器中，加入乙醚50ml，浸泡过夜，加热回流6h，蒸干溶剂，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度。精密量取1ml，置10

3、ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。2.3方法学考察2.3.1线性关系考察精密吸取该对照品溶液2，5，10，15，20，25，30，40μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，熊果酸进样量为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程：Y=542.6263X-7.2143，相关系数r=0.99998。表明熊果酸在0.2～40μg范围内具有良好的线性关系。2.3.2精密度实验精密吸取熊果酸对照品溶液，重复进样5次，20μl,考察测定的精密度，熊果酸峰面积积分值分别为1096.6，1092.8，1089.

4、9，1107.5，1100.1。平均值为1097.38，相对标准偏差为0.62％。2.3.3重复性实验取同一批号的夏枯草6份，依上述条件测定含量，样品熊果酸含量分别为2.5197%，2.4896%，2.7047%，2.6595%，2.6678%，2.6132%，相对标准偏差为3.32%，表明方法的重复性较好。2.3.4稳定性实验取同一标准品溶液，室温下放置，分别在0，24h进样20μl测定，熊果酸峰面积积分平均值分别为1095.9，1097.4。表明样品溶液在室温下比较稳定。2.3.5加样回收率实验取已知含量

5、的夏枯草样品，分别添加熊果酸对照品后，同上述条件，进行测定。结果见表1。表1加样回收率实验结果（略）2.3.6样品测定按上述条件测定所采集自浙江、重庆、四川等地的夏枯草样品中熊果酸含量。结果见图1～2及表2。图1对照品HPLC图（略）图2样品HPLC图（略）3讨论3.1提取条件的选择实验中以熊果酸的含量作为考察指标，筛选并确定最佳提取方法，比较不同提取溶剂（甲醇、乙醇、乙醚）索氏提取、不同提取时间（2，4，6，8h）对熊果酸含量的影响。结果表明，以乙醚为溶剂提取效果最好，6h已基本提取完全，故采用乙醚索氏提取

6、6h。表2不同产地夏枯草中的熊果酸含量（略）3.2流动相的选择曾考察了用甲醇作流动相，但熊果酸峰与杂质峰不能分离，所以改作乙腈作流动相。曾用不同比例的乙腈与水作流动相，但峰形不佳，可能是熊果酸有部分解离的缘故。所以改用0．04mol/L磷酸氢二钠，用5%磷酸调pH值，用pH值分别为2.6，2.7，2.8和2.9等4种缓冲盐溶液，在pH2.6和2.7两种条件下，表现为基线不稳，噪声大，而2.8与2.9两种pH值条件下，又以pH为2.8时峰形较好，熊果酸的保留时间为21.9min。《中国药典》2005年版Ⅰ部夏枯

7、草项下规定，按干燥品计算，原药材含熊果酸的总量不得少于0.12％［1］。从上述测定结果可见，所选不同产地的药材均符合《中国药典》标准。但是不同商品夏枯草中有效成分含量差异显著，四川峨眉产的夏枯草中，熊果酸含量最高，四川南允熊果酸含量最低。分析主要影响因素可能是不同遗传基础和生态环境（光照、气候、土壤）的不同所致。所以加强药材来源管理和对药材质量控制是很有必要的。该研究结果为评价不同产地夏枯草质量提供了科学依据。【