hplc法测定阿莫西林颗粒剂的含量及有关物质

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1、HPLC法测定阿莫西林颗粒剂的含量及有关物质作者：洪建文李趣嫦王彦蝶【摘要】目的建立阿莫西林颗粒剂中阿莫西林的含量测定及有关物质检查的方法。方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（pH值5.0）乙腈（体积比97.5∶2.5）为含量测定的流动相；以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（pH值5.0）乙腈（体积比99∶1）为流动相A，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（pH5.0）乙腈（体积比80∶20）为流动相B，梯度洗脱检查有关物质，检测波长230nm，柱温30℃，流速1.0

2、mL/min。结果阿莫西林分别在0.1～1mg/mL(r=0.9999，n=7)与0.049～0.0012mg/mL(r=0.9998，n=5)范围内与峰面积线性关系良好，低、中、高3个浓度的回收率分别为100.2%、99.8%和100.0%(RSD=0.2%，n=9)。阿莫西林有关物质检查的检测限为2ng，且主成分与有关杂质均能有效分离。结论本文建立的含量测定方法快速、准确、重现性好，有关物质检查方法专属、灵敏，可用于阿莫西林颗粒剂的质量控制。【关键词】阿莫西林颗粒剂含量测定有关物质高效液相色谱法阿莫西林

3、颗粒剂是香港联邦制药厂有限公司产品，是广谱半合成青霉素类抗生素，具有疗效好、不易致过敏等优点，广泛应用于儿童呼吸系统、泌尿生殖系统、消化系统感染。阿莫西林颗粒剂现行质量标准为进口药品注册标准。该标准采用选择性较差，影响因素较多，试剂配制繁杂且有一定毒害，操作步骤也较繁琐的紫外分光光度法进行含量测定，未进行有关物质的检查。该制剂在《国家药品标准》化学药品地方标准第二册中有收载，也未进行有关物质检查。作为儿童药品，为了更好地控制本产品质量，提高进口注册标准，保证产品的疗效，本文采用高效液相色谱法［1-4］对阿莫

4、西林颗粒剂中阿莫西林的含量及有关物质进行研究，建立了快速、准确、重现性好的含量测定方法及专属、灵敏的有关物质检查方法，可更好用于本品的质量控制。　　1仪器与试药　　Agilent1100高效液相色谱仪，Agilent1200高效液相色谱仪，SartoriusBP211D万分之一电子天平。　　阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，批号为130409200609，纯度为86.6%，供含量测定用），阿莫西林颗粒剂（香港联邦制药厂有限公司，批号为17345、17374、17146、17155，规格：0.125g

5、/包），乙腈（色谱纯），磷酸二氢钾、氢氧化钾、氢氧化钠（分析纯），水为超纯水。　　2方法与结果　　2.1检测波长的选择　　取样品适量，加流动相溶解并稀释，在波长200～300nm之间进行紫外扫描，结果阿莫西林在230nm波长处有最大吸收，同时杂质在230nm也有较大响应。因此选择230nm为本法的检测波长。　　2.2含量测定　　2.2.1色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用2mol/L的氢氧化钾调节pH值至5.0）乙腈（体积比97.5∶2.5）为流动相，流速为1.0

6、mL·min-1，检测波长为230nm，柱温30℃，进样量20μL。色谱结果见图1。　　A.对照品;B.样品　　图1阿莫西林颗粒剂含量测定的HPLC色谱图（略）　　Figure1HPLCofamoxicillin　　2.2.2溶液的制备对照品溶液：精密称取阿莫西林对照品适量，加流动相制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。　　供试品溶液：取装量差异项下的内容物，研细，精密称取粉末适量，加流动相溶解并定量稀释成每1mL含0.5mg的溶液，滤过，取续滤液，即得。　　2.2.3专属性试验取空白辅料按“2.2.2”项

7、方法制备溶液，进样测定。结果表明空白辅料对样品测定无干扰。将供试品在60℃温度下放置10d，于第10天取样，按“2.2.2”项方法制备溶液，进样测定。结果表明本品经高温加速实验后，杂质总数和总量均有所增加，主成分与各种分解产物完全分离。将供试品在相对湿度92.5%（KNO3饱和溶液），温度35℃下放置10d，于第10天取样，按“2.2.2”项方法制备溶液，进样测定。结果表明本品经高湿加速实验后，杂质总数和总量均有所增加，主成分与各种分解产物完全分离。色谱图见图2。　　A.空白辅料;B.高温降解;C.高湿降解

8、;1.阿莫西林　　图2阿莫西林专属性试验HPLC色谱图（略）　　Figure2HPLCofamoxicillinforselectivitytest　　2.2.4线性关系考察精密称取阿莫西林对照品适量，用流动相溶解并稀释成含阿莫西林0.09947、0.1989、0.3979、0.4973、0.5968、0.7958、0.9947mg/mL的溶液，按“2.2.1”项下的色谱条件进行测定，以质量浓度（ρ）为横坐标，峰