正交设计法优化野菊花中蒙花苷的提取工艺论文

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1、正交设计法优化野菊花中蒙花苷的提取工艺论文张明，程文明*，李俊，陆维丽，张云静，张群林【摘要】目的为野菊花中主要黄酮成分蒙花苷提取工艺的确定提供实验依据。方法采用正交设计的方法优化提取方案，RP-HPLC法测定蒙花苷的质量分数。结果最终确定优化提取方案为80%乙醇，按8倍药材质量的溶剂量.freelumextractiontechnologyofLinarinfromChrysanthemumindicumL..MethodsTheorthogonaldesignandRP-HPLCmethodumextractioncondition

2、esamountof80%alcoholandrefluxing2hrepeatedlyfor3times.ConclusionThevolumeofsolventandextractingtimehadobviouseffectontheextractingefficiencyofthethreeflavonoidsinChrysanthemumindicumL.Theoptimalmethodissuperiortothenineexperimentsinorthogonaldesign.Keyumindicum;Linarin;R

3、P-HPLC;Extractiontechnology野菊花为菊科植物野菊ChrysanthemumindicumL.的头状花序，别名为野黄菊花、苦薏、山菊花、甘菊花，作为常用药材收录于2005版《中国药典》(Ⅰ部)中。其性凉，味苦、辛，归肺、肝经，具有清热解毒、消散痈肿、疏风平肝之功效，在我国的药用历史悠久。现代药理证明：野菊花具有广谱抗菌、抗病毒、降压、增加冠脉血流量、清除活性氧自由基等作用。现今临床上已将野菊花应用于风热感冒、高血压病、肺炎、口疮、痈疖等疾病的治疗1。蒙花苷为野菊花中黄酮化合物的代表成分，在野菊花中有较高的含量。本

4、实验以其质量分数为指标，采用正交设计法，从提取溶剂、提取时间、溶剂量以及提取次数入手，对蒙花苷的提取工艺进行优化。1试剂与仪器无水乙醇(上海振兴化工厂，批号：200905317)、甲醇(购自江苏科瑞思特工贸有限公司，批号：200705288)、双蒸水(自制)、冰醋酸(国药集团化学试剂公司，批号：T20081010)。除甲醇为色谱纯外，其余试剂均为分析纯。蒙花苷(批号：111528-200303)对照品均购自中国药品生物制品检定所。蒸发回流装置、水浴锅、岛津LC-20A高效液相色谱仪、岛津SIL-20A自动进样器、岛津CTO-10AsVP

5、柱温箱、岛津SPD-20AU紫外检测器、十万分之一分析天平。超声提取器(昆山市超声仪器有限公司)。2方法与结果22.1提取工艺的筛选提取工艺设计：取野菊花药材3g各9份，根据有关资料和预实验，以提取溶剂(A)、溶剂量(B)、提取时间(C)、提取次数(D)为考察因素，每个因素选择3个水平，选用L9(34)正交表进行实验，以蒙花苷百分含量为考察指标，按照L9(34)正交设计实验表进行实验，提取液置于容量瓶中，用提取溶剂定容至刻度。因素水平表见表1。表1因素水平表2.2色谱条件色谱柱：大连依利特ODSC18(4.6mm×250mm，5μm)色

6、谱柱;流动相：A相为甲醇，B相为2.5%冰醋酸水溶液，进行梯度洗脱，0～12min，由85%～80%，12～15min，由80%～72%，15～25min，由72%～60%，25～40min，由60%～45%，40～50min，由45%～5%，50～60min为5%;流速：1ml/min;柱温：35℃;进样量：20μl;检测波长：326nm。图1蒙花苷标准品HPLC色谱图2.3标准品的制备精密称取蒙花苷标准品1.0mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制得标准品原溶液，备用。蒙花苷标准品色谱图见图1。2.4线性关系的

7、考察精密吸取蒙花苷标准原液0.5ml，置于5ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。以此方法等比稀释3次。再吸取标准原液1ml，置于5ml容量瓶中，稀释至刻度，以此方法等比稀释2次。分别吸取上述溶液20μl进样，在上述色谱条件下进行分析，以标准品质量浓度的对数为横坐标，峰面积的对数为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，得蒙花苷回归方程为Y=0.9818X+10.522，R2=0.9998，n=7。表明蒙花苷浓度范围在0.1～100mg/L内，线性关系良好。2.5样品溶液的制备与含量测定精密吸取提取液适量置于5ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，过滤

8、。置于1ml进样瓶中，每次进样20μl，测定蒙花苷峰面积，代入回归方程，计算百分含量。样品色谱图见图2。图2样品HPLC色谱图2.6结果根据以上实验方法测得蒙花苷质量分数，实验结果见表2，方差分析见表3。表