正交设计法优化超声破壁提取麦冬皂苷d的工艺研究论文

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1、正交设计法优化超声破壁提取麦冬皂苷D的工艺研究论文.freelpusX40细胞生物显微镜（日本Olympus）；RT-5型中药粉碎机（浙江缙云县超力机械厂）；BS224S型电子分析天平（北京塞多利斯天平有限公司）。麦冬，购自河北安国中药市场，产于四川，经鉴定本品为百合科沿阶草属植物麦冬的干草块茎；麦冬皂苷D标准品（含量98%，天津一方科技有限公司）；高氯酸（分析纯，天津东方化工厂）。2方法与结果2.1正交实验设计及各因素水平设定选取溶液温度（A）、麦冬粒度（B）、乙醇浓度（C）和浸泡时间（D）为主要考察因素，各因素的水平设定见表1。正交实验采用L9（34

2、）正交表［12］，见表2。表1超声破碎提取麦冬皂苷D实验水平（略）2.2超声对麦冬细胞破壁的影响称取过80目筛麦冬粉末5.0g，加入100ml95%乙醇，先期浸泡12h，在45℃条件下，超声30min后，显微镜下观察其超声前后细胞壁变化情况（见图1～2）。结果表明，超声能使麦冬细胞壁破碎。2.3标准曲线的绘制精密称取麦冬皂苷D7.0mg，置于100ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容，精密吸取0.1，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，5.0ml标准溶液置于具塞试管中，挥干溶剂，加高氯酸10ml，密塞，于60℃水浴加热15min，冰水浴冷却，终止反

3、应，以高氯酸作为空白对照，在295nm和313nm波长处测其吸收值。以浓度C对吸收差值△A作图，得到麦冬皂苷D的标准曲线方程为△A=0.299C+0.008，相关系数为0.9991。线性范围为0.7～35.0mg·L-1。2.4重复性实验称取过80目筛麦冬粉末5.0g，放入具塞三角瓶中，用100ml的95%乙醇溶液浸泡12h。浸泡后在45℃恒温下，超声波振荡提取1h，将提取液进行抽滤。然后将滤液移入旋转蒸发器中蒸发至干。向瓶中加入5ml的高氯酸，密塞，60℃水浴加热15min，冰水终止反应，以高氯酸作空白对照，进行紫外分光度检测。重复进行6次，所得结果R

4、SD=0.97%，表明重复性良好。2.5超声破壁提取麦冬皂苷D正交实验结果将麦冬药材粉碎，过筛，得到80，40，20目麦冬粉末。分别称取麦冬粉末适量，用100ml溶剂浸泡一定时间，在一定温度下进行超声破碎，每隔5min取样，显微镜观察，确定细胞破壁时间。将提取液抽滤，滤渣用少量蒸馏水冲冼，然后将滤液移入旋转蒸发器中蒸发至干；向瓶中加入5ml的高氯酸，密塞，60℃水浴加热15min，冰水终止反应，以高氯酸作空白对照，采用紫外分光光度法检测。分别采用极差法和方差分析法对正交实验的两个结果分别进行分析，确定各因素对实验结果的影响程度（见表2～3）。方差分析结果

5、表明，通过紫外分光光度法检测麦冬皂苷D含量和利用观察麦冬细胞破壁时间来筛选麦冬皂苷D最佳提取工艺结果是一致的。影响提取率的主次因素为B﹥C﹥D﹥A，即粒度﹥乙醇浓度﹥先期浸泡时间﹥温度；最佳超声提取工艺为A2B1C2D2，即45℃条件下，80目粒度，95%乙醇，先期浸泡12h。表2超声破壁提取麦冬皂苷D正交实验设计直观分析结果（略）图1超声前麦冬细胞图（40×10）（略）图2超声后麦冬细胞图（40×10）（略）表3超声破壁提取麦冬皂苷D正交实验方差分析结果（略）本结果运用正交实验助手软件Ⅱ计算，＊表示有显著性（P﹤0.05）3讨论3.1粉碎粒度对细胞超声

6、破壁的影响实验结果表明，粉碎粒度为20～60目时，超声2h后细胞轮廓无显著变化；在80目时，经超声0.5h麦冬细胞壁破碎，粉碎粒度与细胞超声破壁成正比，与正交实验分析结果是一致的。3.2超声温度和先期浸泡时间对细胞破壁的影响在麦冬皂苷D超声提取过程中，温度因素和先期浸泡时间影响不显著。在实际提取操作中，一般采取较低的温度，以减少有效成分的降解，同时可以省去先期浸泡程序，简化操作步骤。通过超声方法对中草药有效成分进行提取，其提取率与细胞破壁有关，利用正交实验分析紫外分光光度法检测麦冬皂苷D含量和观察麦冬细胞破碎状况的结果是一致的，因此，可利用考察麦冬细胞破

7、壁结果来优化提取工艺，简化操作，降低成本，缩减工作量。【