正交设计法优选老鹰茶总皂苷的提取工艺研究

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1、正交设计法优选老鹰茶总皂苷的提取工艺研究作者：陆维丽李俊周维晨程文明汤文建【摘要】　　目的对从老鹰茶中提取总皂苷的工艺进行优化。方法以齐墩果酸为对照品，香草醛-高氯酸法显色，用紫外分光光度法在550nm处测定总皂苷含量。采用L9（34）正交设计，以老鹰茶总皂苷含量为考察指标，考察乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数4个因素对提取的影响。结果最佳提取工艺为80%乙醇，12倍量，回流提取3次，1h/次。结论该工艺经实验重复性好，对进一步的工艺开发有较好的参考价值。【关键词】老鹰茶总皂苷正交实验紫外分光光度法　　老鹰茶系樟科木姜子属毛豺皮樟LitseacoreanaLev

2、e的叶，俗称“白茶”，分布于云南、贵州、四川、安徽等地。民间饮用表明老鹰茶具有解毒消肿、明目益思、生津止渴、解表防暑等功效，且无毒副作用，为药食同源植物［1］，长期饮用有益于健康。老鹰茶中含有黄酮、皂苷、有机酸、香豆素和鞣质等成分，其中皂苷类成分含量丰富［2］。研究老鹰茶的化学成分，对研究天然产物化学多样性，以及寻找新的药用成分具有重要意义。为了有效开发和利用资源，本文采用正交实验对老鹰茶总皂苷的提取工艺进行了研究。　　1仪器与试药　　1.1仪器722S分光光度计；8453紫外-可见分光光度计(Agilent)；电子天平BP211D(Sartorius)；GSY-8电

3、热恒温水浴锅；EK-S5AB电热真空干燥箱。　　1.2试药齐墩果酸标准品，购自中国药品生物制品检定所；老鹰茶，2006-05购自安徽省宁国县茶农，阴干备用，经植物学鉴定为樟科木姜子属毛豺皮樟LitseacoreanaLeve的叶。试剂均为分析纯，水为双蒸馏水。　　2方法与结果　　2.1标准曲线的制作［3］精密称取经120℃干燥至恒重的齐墩果酸标准品5.0mg，置于25ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，即得对照品溶液(每毫升含齐墩果酸标准品0.2mg)。精密量取对照品溶液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml于10ml试管中，抽干甲醇，加0.2ml5%香草醛，0

4、.8ml高氯酸，摇匀于60℃水浴中加热15min，冷却，加冰醋酸5ml，摇匀。以相应试剂做空白，在8453紫外-可见分光光度计上进行全波长扫描，最大吸收波长为（λmax）550nm。按分光光度法在550nm波长处测定吸光度。以吸光度值(Y)为纵坐标，对照品浓度(X)为横坐标绘图，得回归线性方程Y=53.666X-0.0674，r=0.9999，线性范围：6.6667～33.3333mg·L-1。　　2.2提取溶剂的选择　　2.2.1水提取法精密称取老鹰茶5g，加水50ml，在水浴上加热回流提取1h，趁热过滤，共提取2次，洗涤残渣，合并滤液和洗涤液，蒸干溶剂。固体水溶后

5、，正丁醇萃取，萃取液过氧化铝柱，收集流出液，定容至200ml容量瓶中，摇匀，待用。　　2.2.2乙醇提取法精密称取老鹰茶5g，加80%乙醇50ml，在水浴上加热回流提取1h，趁热过滤，共提取2次，洗涤残渣，合并滤液和洗涤液，蒸干溶剂。固体水溶后，正丁醇萃取，萃取液过氧化铝柱，收集流出液，定容至200ml容量瓶中，摇匀，待用。　　2.2.3样品中总皂苷的含量测定精密量取供试品溶液0.3ml，按标准曲线方法进行操作，测定吸光度值，由回归方程计算样品中总皂苷的含量。结果见表1。　　表1提取溶剂与含量的关系（略）　　2.3正交实验设计与结果根据药材性质和生产实际要求，拟定影响

6、浸出效果的4个主要因素，即A为乙醇浓度(%)，B为乙醇用量(倍体积)，C为提取时间(h/次），D为提取次数，每个因素选择3个水平，编制因素水平表见表2。　　表2因素水平（略）　　称取适量老鹰茶干燥粗粉9份，按正交实验设计的工艺进行提取，以老鹰茶提取物中总皂苷含量为考核指标，对正交实验结果进行方差分析见表3～4。　　表3正交试验(L934)直观分析（略）　　表4方差分析（略）　　根据分析结果可知，各个因素对老鹰茶总皂苷提取效果的影响程度依次为A（乙醇浓度）>D（提取次数）>C（提取时间）>B（乙醇用量），且对提取效果影响有统计学意义的因素是因素A（乙醇

7、浓度）。综合直观分析和方差分析的结果，老鹰茶总皂苷理想的提取工艺方案是A3B3C1D3，即用12倍量的80%乙醇，回流提取3次，1h/次。　　2.4提取工艺的验证实验为进一步考察上述最佳工艺的稳定性和合理性，按该工艺条件进行重复性实验3次，分别测定老鹰茶总皂苷的含量。结果见表5。测定的结果均等于或优于正交实验表中的任何一组，重复性好，RSD=0.934%(n=3)。说明该工艺稳定可行。　　表5最佳工艺的验证实验（略）　　3讨论　　香草醛-高氯酸法显色体系最大吸收波长在550nm处，该显色体系呈色稳定，但由于老鹰茶粗提物中有色物质的干扰，粗提物须经过氧