结核杆菌对利福平药物的敏感性试验

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1、结核杆菌对利福平药物的敏感性试验【摘要】目的分析结核分枝杆菌对利福平的耐药现况，为结核病的防治提供依据。方法采用直接涂片检查法和培养法,对肺结核病人的痰液进行检查，阳性标本经抗酸染色镜检确认后，采用绝对浓度法的间接法进行耐药性测定。结果131例疑似肺结核病人痰标本中，直接涂片法检出阳性标本21例，阳性检出率为16.0%（21/131）；培养法共检出阳性标本56例，阳性检出率为42.7%（56/131）。比较两种检测方法的阳性检出率，差异有显著性（P<0.05）。培养法高于直接涂片法。将培养阳性标本进行利福平药物敏感性试验，其中有17株发生耐药，耐药率为30.4%（17/56

2、）。结论结核杆菌对利福平的初始耐药率仍处在较高水平，必须进一步加强对耐药结核杆菌的监控。【关键词】结核分枝杆菌福平药敏试验　　Studyontheprimarydrugresistanceagainstrifampicinfortubercolusis　　ZHANGSheng,CHENSidong,ethodsSputumfluidisexaminedearandcultureonmodifiedLoediumaftertreatmentplespicinusingabsoluteconcentrationmethod.ResultsThepositiverateearingm

3、ethodearingmethodarydrugresistancearydrugagainstrifampicinisstillatahigherlevel.Monitoringoftheresistanceoftuberculosisshouldbestrengthened.　　Keyycobacteriumtuberculosis;rifampicin;drugresistancetest　　结核病是我国重点控制的重大疾病之一，也是全球关注的公共卫生问题和社会问题,世界卫生组织已将结核病作为重点控制的传染病之一。全球80%的结核患者分布在22个结核病高负担国家,中国是其中之

4、一,结核患者人数仅次于印度居世界第二位［1］。但是，近10年来,临床上发现抗结核药的耐药性对结核病化疗效果的影响日益严重,尤其是利福平耐药的发生率不断上升给抗结核治疗带来较大的困难。为了解结核杆菌对利福平耐药的状况，为临床合理、联合用药提供依据，特作本研究。结果报告如下。　　1材料与方法　　1.1病例来源　　2005年11月～2006年5月，在广州市白云区某医院、深圳市宝安区某医院检查首次确诊为肺结核的病人，共131例。病例发病前均未服用过抗结核药物。结核分枝杆菌参考菌株为H37Rv敏感株，由中国结核病防治临床中心国家参比实验室提供。　　1.2痰液直接涂片检查　　用接种环取脓性痰

5、液1～2环，均匀涂于载玻片上，待自然干燥，微火焰固定，经抗酸染色后镜检。　　　　1.3分枝杆菌培养　　1.3.1培养基　　为酸性罗氏培养基。成分：谷氨酸钠(纯度95%以上)7.2g,KH2PO414g,MgSO4·7H2O0.24g,枸橼酸镁0.6g,甘油12mL,蒸馏水600mL,马铃薯淀粉30g,新鲜鸡卵液1000mL,2%孔雀绿水溶液20mL。　　1.3.2制备方法　　各盐类成分溶解后，加马铃薯淀粉，混匀，沸水浴煮沸1h呈糊状(不时摇动，防凝块)，待冷后，加经消毒纱布过滤的新鲜鸡卵液，混匀，再加入2%孔雀绿水溶液，混匀，分装于经121℃高压灭菌的中型试管，每管加培养基约7m

6、L，斜置血清凝固器内1～2层，斜面高度占试管2/3,90℃1.5h或85℃1h间歇2次。冷却后，37℃无菌试验24h。培养基斜面颜色鲜艳，表面光滑无泡，有一定韧性和酸碱缓冲能力,4℃保存，1个月内使用。　　1.3.3接种方法　　取痰标本1～2mL，加入2倍量4%NaOH，于室温下放置30min（期间振荡2～3次）后，取处理消化后痰液0.1mL，无菌操作接种于培养基斜面上，每份标本同时接种2支酸性改良罗氏培养基，放置37℃恒温箱培养。每周观察1次,记录细菌生长情况，至8周为止。　　1.4药敏试验　　具体操作参照结核病诊断细菌学检验规程［2］。　　1.4.1药物　　利福平由美国Sig

7、ma公司生产，北京索莱宝科技有限公司提供。为纯品，粉剂。　　1.4.2培养基　　改良罗氏培养基。成分：谷氨酸钠(纯度95%以上)7.2g,KH2PO42.4g,MgSO4·7H2O2.4g,枸橼酸镁0.6g,甘油12mL,蒸馏水600mL,马铃薯淀粉30g,新鲜鸡卵液1000mL,2%孔雀绿水溶液20mL。　　1.4.3制备方法　　制备方法同酸性罗氏培养基，只是在培养基制成后分装于中型试管前，按每100mL培养基加入1mL利福平稀释药液，混匀，再行分装中型试管，加温凝固成斜面。