结核杆菌对异烟肼药物的敏感性试验

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1、结核杆菌对异烟肼药物的敏感性试验作者：汪保国　陈思东　周卫平　张胜　周勇　　【摘要】目的研究结核分枝杆菌对异烟肼药物的敏感性状况，为结核病的防治提供理论依据。方法采用直接涂片检查法和培养法。对肺结核患者的痰液进行检查，阳性标本经抗酸染色镜检确认后，采用绝对浓度法的间接法进行耐药性测定。结果131例疑似肺结核患者痰标本中，直接涂片法检出阳性标本21例，阳性检出率为16．0%（21/131）；培养法共检出阳性标本56例，阳性检出率为42．7%（56/131）。比较2种检测方法的阳性检出率，差异有统计学意义（P<

2、0．05）。培养法高于直接涂片法。56株结核杆菌标本进行异烟肼的药物敏感性试验，其中有47株发生耐药，耐药率为83．9%，且都是高浓度耐药。结论结核分枝杆菌对异烟肼的初始耐药率处于较高水平，必须进一步加强对耐药结核杆菌的监控。　　【关键词】结核分枝杆菌；异烟肼；药敏试验　　　　【Abstract】ObjectiveTostudythesituationandtrendofisoniazidresistancefortuberculosisandprovidethebasisfortuberculosisp

3、reventionandtreatment.MethodsSputumfluidinedbydirectsmearandcultureonmodifiedloediumaftertreatmentplesethod.ResultsThepositiverateearingmethodearingmethodarydrugresistancearydrugagainstIsoniazidstilltobeatahigherlevel.Monioringoftheresistanceoftuberculosissho

4、uldbestrengthened.　　【Keytuberculosis;Isoniazid;Drugresistanceanalysis　　　　结核病(tuberculosis)是由结核分枝杆菌感染引起的人畜共患的严重传染病，也是人类单一致病菌感染导致死亡率最高的细菌感染性疾病。结核病的发病率及死亡率在全球范围内均有上升的趋势而且由于获得性免疫系统缺陷综合征-艾滋病的流行，在非洲、美洲许多国家及某些亚洲国家出现结核杆菌和艾滋病毒双重感染的患者，这是结核病第3次回升的新动向。gSO4•7H200．

5、24g,枸椽酸镁0．6g,甘油12ml,蒸馏水600ml,马铃薯淀粉30g,新鲜鸡卵液1000ml,2%孔雀绿水溶液20ml。　　1．3．2制备方法各种盐类成分溶解后，加马铃薯淀粉，混匀，沸水浴煮沸1h呈糊状(不时摇动，防凝块)，待冷后，加经消毒纱布过滤的新鲜鸡卵液，混匀，再加入2%孔雀绿水溶液，混匀，分装于经121℃高压灭菌的中型试管，每管加培养基7m1，斜置血清凝固器内1～2层，斜面高度占试管2/3,90℃1．5h或85℃1h间歇2次。冷却后，37℃无菌试验24h。培养基斜面颜色鲜艳，表面光滑无泡，有一定韧

6、性和酸碱缓冲能力,4℃保存，1个月内使用。　　1．3．3接种方法取痰标本1～2ml，加入2倍量4%NaOH，于室温下放置30min（期间振荡2～3次）后，取前处理消化后痰液0．1ml，无菌操作接种于培养基斜面上，每份标本同时接种两支酸性改良罗氏培养基，放37℃恒温箱培养。每周观察1次,记录细菌生长情况，至8周为止。　　1．4药敏试验具体操作参照结核病诊断细菌学检验规程[5]。　　1．4．1药物异烟肼为纯品，结晶状。由上海楷洋生物技术有限公司提供。　　1．4．2培养基为改良罗氏培养基。成分：谷氨酸钠（纯度9

7、5%以上）7．2g；磷酸二氢钾2．4g；硫酸镁0．24g；枸橼酸镁0．6g；丙三醇12ml；蒸馏水600ml；马铃薯淀粉30g；新鲜鸡卵液1000ml；2%孔雀绿水溶液20ml[5]。　　1．4．3制备方法制备方法同酸性罗氏培养基。只是在培养基制成后分装试管之前，按每100ml培养基加入1ml异烟肼药液，混匀，再行分装中型试管，加温凝固成斜面[5]。　　1．4．4异烟肼药液的配制异烟肼药物为纯品，生物效价为1000μg/mg，配制2个浓度的含药培养基，药物浓度为：1、10μg/ml，根据标本例数，每支试管含培

8、养基7ml，计算所需培养基的量，再得出所需药物量。每100ml的培养基加入1ml的药液。所得培养基即为含药培养基[5]。　　1．4．5菌悬液的制备取在酸性罗氏培养基生长旺盛的2~3周的菌落，用磨菌器仔细研磨成乳液样菌液、以0．5%Tg/ml的均匀菌液，备用。　　1．4．6接种将菌悬液10倍稀释至10-2mg/ml，取0．1mg接种于含药及对照培养基内，37℃培养