大肠杆菌检测方法的研究及进展

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1、大肠杆菌检测方法的研宄及进展（长沙医学院基础医学院湖南省长沙市410219）摘要：大肠杆菌是国际上公认的卫生检测指示菌，如何采用经济有效的方法来检测食品或环境中的大肠杆菌显得十分必要。木文综述了大肠杆菌近年来发展的新的检测方法，为食品中大肠杆菌的检测提供一定的参考。关键词：大肠杆菌；检测方法；研究进展大肠埃希氏菌类于肠杆菌科，归属于埃希菌属，是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，主要寄生在大肠内。它侵入人体一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。因而快速准确的检测大肠杆菌有着重

2、大意义。大肠杆菌检测的传统方法有很多，如滤膜法，平板计数法等。木文旨在综述最近出现的新的检测方法，为以后大肠杆菌检测技术的发展提供一些麥专。1.1基于分子生物学技术的大肠杆菌快速检测1.1.1聚合酶链式反应（PCR）其基木原理是利用碳、磷、硫的同位素或者半抗原、酶牛.物等标记特异的核苷酸片段制成核酸探针。1.1.2基因芯片技术基因芯片技术是它将各种基因寡核苷酸点样于芯片的表面，微生物样品DNA经PCR扩增后制备荧光标记探针，然后再与芯片上的寡核苷酸点杂交，最后通过经检测杂交信号的强度及分布确定检测样品中特

3、定微生物的存在与丰度［1］。2.1基于免疫分析法的大肠杆菌快速检测2.1.1酶免疫分析法（ELISA）利用抗原-抗体复合物的性质，EUSA可以进行免疫捕获细胞或抗原。通过抗原与抗体之间的高度亲和性使低含量的抗原也可以被检出。Abuknesha等［2］在2005年提出酶方法和免疫检测串联方法2h内检测低至10cells/mL.的大肠杆菌。2.1.2免疫胶体金标技术（ICGT）该技术是在继荧光素、酶、放射性同位素后发展的以胶体金作为标记物，发生抗原抗体反应后，对抗原或抗体物质进行定量和定性的分析，但应用范围窄

4、，0前只适用于对人肠杆菌的定性或半定量检测，较适用于对致病性大肠杆菌的检测。2.1.3免疫磁球技术（IMB）免疫磁珠技术其基本原理是将磁珠作为抗体的载体，在磁珠与人肠杆菌结合后，通过外加磁场的作用下，达到分离0的微生物的作用。Martina等［3】应用此法从病人及与此相关的奶牛场奶牛的粪便中分离出多株山梨醇阳性的0157：H7大肠杆菌。该方法的显著优点是能够在混合有不同菌种的样品中，迅速而准确的分离出0的的菌株。3.1生物传感器对人肠杆菌的检测生物传感器是以生物化学和传感技术为基础，用酶、抗体、细胞等作为

5、识别元件，与信号转换器和电子测量仪共同构成的分析工具.刘亚军等［4】制备了Tyr/MWNTs-Chit/GCE（酪氨酸酶/多壁碳钠米管-壳聚糖/玻璃碳电极）生物传感器来检测大肠杆菌。此种方法具有高度的灵敏性，简单方便易操作，分析浓度范围广，经济适用性等优点。4.1试剂化的大肠杆菌的检测4.1.1快速测试纸片快速测试纸片是将纸片、纸膜等作为培养基的载体，然后将特定的显色物质附着在上面，最后将微生物置于纸片上让其生长，通过不同的显色来判定食物中的微生物种类。由于在实验过程中只产生了纸片废物，从而大大减少了对环

6、境的污染，是一种非常符合当今吋代特征简单方便高效环保的一种检测方法，具有远人的发展前景。3.1.2显色培养基显色培养法是进段时间发展的一种检测和鉴别细菌的新技术，能在特异性酶作用下游离出产色基因显示特定的颜色，通过直接观察菌落颜色对菌株做出鉴定[5】。与传统培养基相比，它只需要根据菌落的颜色就可以对菌种作出鉴定，具有高度的灵敏度和特异性，可以大大减少由假阳性菌所产生的可以菌落和一系列后续的生化鉴定，进而减少大量的人力物力，适合于对大量样本的检测，符合于当今社会的发展的需求，拥有广大的发展前景。3展望快速检

7、测致病微生物在进年来已经成为国内外研究的热点，相信随着科学技术的发展新的具有更高特异性、更高灵敏度、操作方便、缩短诊断吋间的方法将随着吋代的发展和要求应运而生。参考文献：[1】李玉锋，何洋，周黎黎，等.基因芯片技术在食品致病菌检测中的应用[J].微生物学杂志，2005,25(4):92-94[2]孙克，江郭宏，张东发，etal.Enzymelinkedimmunosorbentassayfordetecting0157：H7[J].DiseaseSurveillance(疾病监测)，2001,16(9)：

8、353-355.[3]MARTINAB.HERBERTS,ALMUTC,etal.Cattlecanbeareservoirofsorbitol-fermentingshigatoxin-productingEscherichiacoliO157:H-strsinsandasourceofhumandiseases[J].JCIinMicrobiol,2000,38(9):3470-3473[4]刘亚军，黄晶晶，程欲晓，等.T