大肠杆菌检测方法的研究

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1、大肠杆菌检测方法的研究达州市疾病预防控制中心四川达州635000摘要：随着我国社会经济的不断发展，国家和居民对于食品安全的关注也越来越高，近年来发牛的食品安全事故中，虽然有着很多新的致病菌污染，但是从疾控系统的数据来看，大肠杆菌的污染依然是目前我国食品安全和疾病监控的主要威胁。当前各个国家，大型微生物检测机构、微生物试剂公司都在不遗余力地开发更为快速、简便、可靠的大肠杆菌检测方法和试剂，以推动大肠杆菌的快速检测技术的发展，木文就当前的主要主流技术和新技术做一综述，以其为技术的发展提供一点思路。关键词：食品安全；大

2、肠杆菌；疾控监控前言：大肠杆菌属于革兰氏阴性杆菌，是一种人类和动物肠道中非常常见的细菌，其在宿主肠道中的含量约为菌群数量的1%左右，一定数量和限定位置的大肠杆菌寄宿在人类的肠道中，不会造成人体的患病，还能合成一定的B族维牛素群和维牛素K。但是如果进入到了人体中的膀胱、胆囊等位置，就会形成条件致病性炎症。目前大肠杆菌的检出是各大国标和商检、质检标准中对于水和食品污染程度的重要评估指标，更是国际上公认和通用的人类居住环境、食品、水质卫牛监测的指标菌，因此其快速、准确、辨识度高的检测技术［1］。一肓都是行业内高度重视和

3、不断推进创新发展的阵地。木文就当前使用的主流检测技术创新技术进行归纳综述，为未来的发展提供一些参考。大肠杆菌检测的主流技术1.1多管发酵法多管发酵法是一种经典的培养检测方法，其主要通过在44°C下对其进行培养，采取带有荧光底物的培养基作为大肠杆菌发酵的糖类物质，连续培养18・24小时之后，连接糖基的荧光底物被水解而有利出来，试管培养物在特定波长的紫外线照射下形成荧光，从而指示出原始样品中大肠杆菌的污染情况⑵。其主要的优点在于操作简便，检测成本不高。对于人规模的样品检测具有一定的优势。容易在基层疾控，尤其是一些县级

4、疾控普及，但是改方法也因为是以统计学为基础的估算法，无法得知菌落的精确值，同时检测时间一般最少都需要18-14小吋，需吋较长。1.2滤膜法该方法主要用于城市用水，江河水和饮用水的检测中。其主要理由是滤膜的富集作用，高通量通过一定体积的待测液体，最后通过培养来计算一定容积液体内的菌落数。滤膜上的大肠杆菌菌落在特定的培养基上呈现具有一定菌落形态特点的特征，易于辨认。该方法对于大容量的待测液体具有较好的适用性，尤其适用于大样本，目标菌含量较低的检测。目前该方法是各大水厂、饮用水制造厂，各级疾控、商检、药监机构对于水质检

5、测的重要方法之一［3］。但其也具有一定的局限性，例如需要配套真空泵，滤膜耗材等配套设施。不锈钢产品循环使用，需要灭菌处理，增加了操作工序。一次性耗材产品则增加了检测成本，在基层疾控的推广上，具有一定的难度。1.3平板计数法平板计数法是一种能够定量的精确检测方法，精确度较好。目前是检测大肠杆菌各种方法中，较为经典和常规的方式，其主要采取涂布和倾注两种不同的方式进行菌落的培养，根据待检测样品的污染程度，可以将其进行一定的梯度稀释，在进行平行的倾注或者涂布。经过1&24小时培养，就可以对其进行精确的计数。目前国内的培养

6、基质量，在培养的精确度上已经非常接近国外的知名品牌，这对于提高我国大肠杆菌平板计数方法的推广和实施，都具有一定的推动作用。目前随着显色培养基的推广，人肠杆菌显色培养基结合平板计数法，能够便捷、快速对样品中大肠杆菌的污染情况进行定量⑷，极大缩短了基层大规模样本筛选的时间。2•创新性技术发展2.1HPLC和GC技术检测GC该方法的原理是，根据食品样品中，尤其是密封食系统中顶部微生物代谢产物二氧化碳的含量来对微生物进行分析，这种检测技术相比较传统技术而言，具有吋间上的优势，一般的培养检测，人都需要1&24小吋的最短培养

7、吋间，所以具有灵敏度高，速度快的特点。但是由于检测二氧化碳，因此在污染菌的种类上，难以及时确认。同时对于一些非发酵菌的污染，容易漏检。HPLC法的主要检测原理是针对人肠杆菌的DNA片段中的磷酸基团可以和TEAA相结合。增加了在柱内的停留时间，在具备一定变性的温度下，可以通过图谱的形式来对其吸收峰进行显示⑸，这种技术灵敏度高、准确性好，一次性投入后，操作成本较低。对于疾控工作的效率提高，很有好处。2.2ATP荧光发光法ATP荧光法是近年来发展对快的微生物检测技术，其核心原理是根据细菌中ATP在一定的荧光素酶促反应下

8、，能够产生-•种能够被专业仪器捕捉到的荧光信号，根据信号源的数量，既可以对样品中的活细数量进行快速的定量。该方法的主要缺点是，由于反应产物的稳定性较差，在产生之后便趋向分解，因此样品检测即吋性较强，对于人规模的样品采集后检测不是太方便。不过荧光光度计都是便携式的，有利于采样现场的即时采样检测，由于该技术所需耗材和仪器成本较高，目前仅用于器具表面清洁程度的快速检测。还不能被