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1、正交试验优选昆布中褐藻酸的提取工艺论文.freelizationofAlginicAcidinLaminariajaponicaAreschbyOrthogonalTestLIUXue-xiang,CHENJian-izetheextractiontechnologyofalginicacidinLaminariajaponicaAresch.MethodsTheinfluenceoftheamountofsolvent,theextractiontimeandtemperature(3factors
2、)onthealginicacidcontentandyieldethodology.ResultTheoptimumextractionconditionessolvent(1%Na2CO3),peratureisthemostimportantfactor.Thecontentofalginicaciddecreaseobviouslyatabove60℃.Theoptimumextractiontechnologyisreasonable.KeyinariajaponicaAresch；algi
3、nicacid；polysaccharide；orthogonaldesign昆布为海带科(Laminariaceae)植物海带LaminariajaponicaAresch.L.ochotensisMiyabe的干燥叶状体,.freel处有最大吸收的原理,测定构成褐藻酸的糖醛酸的含量,优选昆布中褐藻酸的最佳提取工艺。1仪器与试药752型紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂产品)；电动搅拌器(江苏省金坛市金城国胜实验仪器厂产品)；UV-2401型紫外分光光度计(日本岛津产品)。昆布购自南京白云亭农贸
4、市场,经本校药学院陈建伟教授鉴定为海带科(Laminariaceae)植物海带LaminariajaponicaAresch.的干燥叶状体；对照品褐藻酸(自制)；间萘二酚(美国Sigma公司,含量99%以上,78H1166)。正戊醇、乙醚、浓硫酸均为分析纯。2方法与结果2.1正交试验设计根据不同制备工艺对昆布中褐藻酸含量的影响,选择溶剂量、提取时间、提取温度作为考察因素,应用L9(34)正交设计表进行试验。因素水平见表1。表1因素水平表（略）2.2褐藻酸得率测定精密称取干燥剪细的样品2g,加入1%Na
5、2CO3溶液,按L9(34)正交试验表所列进行搅拌提取。离心,取上清液,加稀盐酸(3→10)搅拌至pH2.0,析出凝胶,依次用75%、85%、95%乙醇洗涤脱水,得棕色粉末,50℃干燥至恒重,取出,置干燥器内冷却至室温,精密称定重量,计算得率1。2.3褐藻酸含量测定22.3.1线性关系考察精密称取褐藻酸对照品25.1mg,加入1.25mL80%冷至0℃的硫酸溶液,放置1h,待其溶解后,置50mL量瓶中,加冰水至刻度,摇匀,即得浓度为0.502mg/mL的褐藻酸标准贮备液。分别精密吸取标准贮备液0.1、
6、0.2、0.4、0.6、0.8mL,置10mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得到浓度分别为5.02、10.04、20.08、30.12、40.16μg/mL的标准溶液。再分别精密吸取标准溶液2mL于25mL具塞比色管中,加入2mL间萘二酚溶液及2mL盐酸,振摇混合,将此液在沸水中加热45min,再在冰水中冷却10min,向此液中准确加入10mL乙醚-正戊醇(5∶1)混合液,加盖,激烈振摇混合,分取乙醚-正戊醇层,置752型紫外可见分光光度计于580nm处测定吸收度。以浓度(μg)为横坐标,吸收度A为纵坐
7、标,绘制标准曲线,求得回归方程：A＝0.006882X＋0.01677,r＝0.9994。结果表明,在10.04～80.32μg范围内线性关系良好。2.3.2稳定性试验取某一浓度的标准溶液(20.08μg/mL),精密吸取2mL,按标准曲线制备法每隔10min测定1次A值,RSD＝0.27%(n＝7),表明在1h内溶液是稳定的。2.3.3加样回收率试验取已知含量的1#样品,共5份,每份0.1g,精密称定,分别加入褐藻酸对照品5mg,按样品的含量测定方法进行测定,结果平均回收率为96.74%,RSD＝0
8、.85%(n＝5)。2.3.4样品含量测定精密称取样品粉末10mg,加入2.5mL80%冷至0℃的硫酸溶液,用玻棒磨碎,放置1h,待溶解后,加冰水定容于100mL量瓶中,再精密吸取1mL,加冰水定容于5mL量瓶中,吸取2mL,按“2.3.1”项下方法进行测定,并用外标两点法计算褐藻酸的含量。2.4正交试验结果(见表2)表2昆布中褐藻酸提取工艺正交试验结果（略）注：Y=Y1/Y1×40%+Y2/Y2×60%2.5方差分析(见表3)表3方差分析（略）注：F1
