正交试验优选肿节风的提取工艺

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1、正交试验优选肿节风的提取工艺【关键词】正交试验；肿节风；提取工艺；异嗪皮啶；总黄酮Abstract:ObjectiveTooptimizetheextractionprocedureofSarcandraglabra．MethodsThecontentsofisofraxidinandtotalflavonoidsinedbyHPLCandUVspectrophotometry,respectively.Extractionprocedureizedbyorthogonaltest．ResultsTheoptimalex

2、tractionconditionsethodhashighextractionefficiency，andcouldbeusedforscaleup.Keyb.)Nakai的干燥全草，又名九节茶、接骨草、草珊瑚，其味苦、辛，性平，具清热凉血、活血消斑、祛风通络等功效［1］，主要含有异嗪皮啶(isofraxidin)等香豆素类化合物及落新妇苷(astilbin)等黄酮类成分［2］，主产于广东、广西、江西等地，《中国药典》2005年版一部将其收载为正品药材。本文以高效液相色谱法测定肿节风提取液中异嗪皮啶的含量，以紫外分光

3、光度法测定总黄酮的含量，应用多指标综合评分法对正交试验结果进行分析，为肿节风相关制剂的研究开发提供参考。1仪器与材料1.1仪器Dionexultimate3000高效液相色谱仪（光电二极管阵列检测器、Chromeleon色谱工作站）；BS224S型电子分析天平（北京Sartorius）；UV1101型紫外分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)。1.2材料芦丁对照品（批号：100080200306，含量测定用）、异嗪皮啶对照品（批号：110837200304含量测定用），均购于中国药品生物制品检定所；肿节风药材：购于广

4、州致信药业有限公司，经鉴定符合《中国药典》2005年版一部肿节风项下标准；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。2方法与结果2.1正交试验设计　　依据预试验结果，以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数为考察因素，每因素设3个水平，采用L9（34）正交试验表安排试验（见表1）。表1因素水平表表2正交试验结果2.2异嗪皮啶含量测定2.2.1色谱条件色谱柱：KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈0.2%磷酸溶液（体积比20∶80）；检测波长：344nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min

5、；进样量：20μL。2.2.2对照品溶液的制备精密称取异嗪皮啶对照品0.0105g，用甲醇溶解并定容至10mL量瓶中，精密吸取2mL，用甲醇定容至50mL，得质量浓度为0.042mg/mL的对照品储备溶液。2.2.3供试品溶液的制备称取肿节风药材20g，置500mL的圆底烧瓶中，按表2条件提取，滤过，分别定容至500mL量瓶中，作为样品溶液。精密量取样品溶液25mL，用提取溶剂分别定容至50mL，精密吸取5mL，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至10mL，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。2.2.4标准曲线的

6、制备精密吸取异嗪皮啶对照品储备溶液1、2、3、5、10、15mL，置25mL量瓶中，加甲醇定容，用0.45μm的微孔滤膜滤过，精密吸取20μL注入液相色谱仪，按上述条件测定异嗪皮啶吸收峰峰面积，以异嗪皮啶微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝948.96X+0.02，r=0.9999，表明异嗪皮啶进样量在0.0336～0.504μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。2.2.5含量测定精密吸取供试品溶液、对照品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定异嗪皮啶峰面积，计算异嗪皮啶含量。2.3总黄酮

7、含量测定［3］2.3.1标准曲线的制备精密称取芦丁对照品20.8mg，置100mL量瓶中，加体积分数为60％的乙醇溶解并定容至刻度，分别精密吸取0、2、3、4、5、6、7mL，置25mL量瓶中，分别加体积分数为60％的乙醇补足至7mL，加入质量分数为5％亚硝酸钠1.0mL，摇匀，静置6min，加入质量分数为10％硝酸铝1.0mL，摇匀，静置6min，再加入质量分数为4％的氢氧化钠10.0mL，用体积分数为60％的乙醇定容至25mL，摇匀，静置10min后，用可见－紫外分光光度计于510nm处测吸光度。以芦丁对照品的浓度为

8、横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：2.3.3含量测定精密吸取供试品溶液2mL置25mL量瓶中，按“2.3.1”项下方法操作，测定吸光度值，计算样品中总黄酮的含量。2.4正交试验结果及分析按异嗪皮啶含量和总黄酮含量各占50％的权重综合评分，对正交试验结果进行极差和方差分析，试验结果见表2。从结果可知，因