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1、模拟失重对成骨细胞整合素亚单位表达的影响作者：杨志，王冰，李莹辉，聂婕霖，孙喜庆，张舒【关键词】失重；成骨细胞；整合素类【Abstract】AIM:Toinvestigatetheexpressionofintegrinsubunitsinosteoblastsduringsimulatedalgravity(1G)andsimulatedepoints(24,48,72h).ReversetranscriptionPCRanalysisadetoexaminethegeneexpressionofα5,αvandβ1
2、integrinsubunits.EachvaluealizedagainstthatofβactinmRNA.Moreover,theproteinexpressionsofallkindsofintegrinsubunits24hofrotationinclinostatbutnotinstationarycultures.Theexpressionofintegrinα5mRNAdecreasedat24,48and72hofrotationby11.3%,18.7%and9.8%,respectively.Th
3、esametrendRNAas23.0%,12.3%and16.7%,respectively.Moreover,theexpressionsofintegrinβ1mRNAindifferentperiods24hofrotationinclinostat.Theexpressionofintegrinα5at24,48and72hdecreasedby13.1%,20.3%and11.9%,respectively.ThesametrendulatedRNA表达，并计算与内参照β肌动蛋白(betaactin)mRN
4、A水平的比值.同时用RNA在模拟失重的24,48和72h分别下降了11.3%,18.7%和9.8%；整合素αvmRNA分别下降了23.0%,12.3%和16.7%；整合素β1mRNA分别下降了15.3%,11.4%和26.4%.与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）.整合素亚单位蛋白和基因表达的变化相似.整合素α5在模拟失重的24,48和72h分别下降了13.1%,20.3%和11.9%；整合素αv的蛋白表达分别下降了7.4%,18.2%和25.2%；整合素β1蛋白表达分别下降了18.6%,25.9%和2
5、7.5%.与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）.结论：在模拟失重环境下，整合素α5,αv和β1亚单位mRNA的表达发生了下调性变化.【关键词】失重；成骨细胞；整合素类0引言在失重环境下，骨骼组织发生显著的变化：骨骼脱钙、骨量减少及力学性能下降，严重影响骨骼的结构和功能，威胁航天员返回地球后的安全［1］.骨骼脱负荷引起的临床及失重环境下的骨质丧失已成为妨碍人类健康和太空探索能力的难题之一.目前有许多研究表明，失重和模拟失重导致的骨丢失是一个以骨形成抑制起主导作用的过程，特别是成骨细胞的增殖、分化功能以及细
6、胞内细胞骨架的聚合与解聚受到了抑制，而成骨细胞的代谢紊乱，又进一步抑制了细胞的骨骼形成能力.在航天医学领域，有关成骨细胞在失重或模拟失重环境下整合素变化的研究鲜见报道.本实验利用大鼠乳鼠颅骨成骨细胞，观察模拟失重环境对细胞整合素亚单位基因表达的影响，以探讨失重致骨骼结构改变的可能细胞学机制.1材料和方法1.1材料达尔伯克必需基本培养基(dulbeccosmodifiedeaglemedium,DMEM)由Biotech生产；RNA提取试剂盒（批号：D312T）,RTPCR试剂盒（批号：#A1260）为美国Promega
7、公司产品；整合素的α5,αv,β1亚单位和β肌动蛋白引物由北京赛百盛基因技术有限公司合成，PAGE法纯化.1.2方法1.2.1成骨细胞的分离SD大鼠乳鼠4只由第四军医大学动物中心提供，体质量不限.利用多段酶消化法无菌摘取大鼠乳鼠颅骨并去除骨膜.将颅骨碎片用2.5g/L胰蛋白酶消化90min，去除上清液后，颅骨碎片用2.5g/L的胰蛋白酶和1g/LI型胶原酶混合液消化30min，重复4次.将消化上清液1000r/min离心5min，将细胞加入含100mL/L胎牛血清(FBS),100U/mL青霉素及0.01mg/mL链霉
8、素的DMEM培养液，按细胞数2×105个细胞/瓶接种于25mL培养瓶中.1.2.2成骨细胞的培养细胞在37℃50mL/LCO2恒温孵箱中孵育并及时进行传代.经37℃50mL/LCO2恒温孵箱中培养46h后，细胞换液，每瓶灌满含100mL/LFBS的DMEM培养基，密封瓶口.再随机分为2组（每组12瓶细胞，约3×106个细胞）：模拟
