脑缺血-再灌注诱导大鼠信号转导与转录激活子

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1、脑缺血/再灌注诱导大鼠信号转导与转录激活子作者:李洪春，马萍，徐凯，杨春【摘要】目的探索局灶脑缺血/再灌注不同时间诱导大鼠缺血中心区（同侧皮层）和周围区（同侧纹状体）信号转导与转录激活子-1（STAT1）的激活变化。方法采用SD雄性大鼠线栓法制作右大脑中动脉缺血（MCAO）局灶脑缺血模型。运用抗STAT1和抗磷酸化STAT1抗体做免疫印迹（IB）检测缺血2h再灌注不同时间缺血中心区和周围区STAT1的表达及激活变化。结果缺血2h再灌注不同时间，缺血中心区及周围区STAT1的磷酸化水平显著增加，再灌注24

2、h达到峰值，与假手术组相比分别增加约3.1和3.8倍（P＜0.05），但在整个再灌注过程中其蛋白表达并没有明显的变化。结论局灶脑缺血再灌注能引起缺血中心区和周围区STAT1磷酸化水平的显著增加，提示缺血性脑损伤诱导STAT1的激活可能参与缺血同侧皮层及纹状体神经元细胞的病理生理过程。【关键词】MCAO；局灶脑缺血；信号转导与转录激活子-1（STAT1）STAT1ia/reperfusioninrats【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheactivationofsigna

3、ltransducerandactivatoroftranscription-1(STAT1)afterfocalbrainischemiainthelesioncore(cerebralcortex)andlesionperiphery(striatum).MethodsMiddlecerebralarteryocclusion(MCAO)ischemiamodelofSDratshomogenatesmunoblotting（IB）usinganti-STAT1andanti-p-STAT1(Tyr

4、701)antibodies.ResultsTheexpressionofSTAT1protEInia2handreperfusiondifferenttime，butphosphorylationlevelsofSTAT1(3.1-and3.8-foldsvsshamrespectively).ConclusionTheactivationofSTAT1ia.Theincrementsofp-STAT1couldinvolveinthechangesofpathophysiologyinthenerv

5、ouscells.【Keyia；signaltransducerandactivatoroftranscription-1(STAT1)；middlecerebralarteryocclusion(MCAO)STAT1作为信号转导与转录激活子（SignalTransducersandActivatorsofTranscription，STATs）家族的成员之一，在IFN-γ介导的生物学效应中起到必不可少的作用，并介导多种细胞因子、生长因子、激素等从细胞表面受体并转入核内的胞内信号，它是一种具有信号转导与

6、转录激活双重功能的蛋白质，存在于多种类型的组织和细胞中，它的激活与免疫反应和细胞生长抑制有关［1］。以往的研究表明多种应激因素包括热、活性氧、缺血等都能激活STAT1［2～4］。本实验运用MCAO（middlecerebralarteryocclusion）局灶脑缺血模型，研究缺血中心区皮层和周围区纹状体，在缺血2h再灌注不同时间引起的STAT1的快速激活，旨在探索STAT1在缺血性脑损伤中的病理反应机制。1材料与方法1.1试剂抗STAT1抗体（M-22，sc-592）为SantaCruzBiotech

7、logy产品，抗p-STAT1单克隆抗体（Tyr701，#9171）购自CellSignalling公司。Na3VO4和Leupeptin等所有蛋白抑制剂为Sigma产品。硝酸纤维素薄膜（NC膜）为Pharmacia产品。HEPES为Amresco产品。其余试剂为国产分析纯。1.2动物及脑缺血模型雄性SpragueDraley(SD)大鼠18只（徐州医学院实验动物中心提供），体重250～320g，随机分为三小组。采用Longa等［5］线栓改良法建立SD大鼠单侧大脑中动脉缺血（MCAO）模型，即10%水

8、合氯醛（0.3ml/100g）腹腔注射麻醉，钝性分离右颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA)。结扎CCA、ECA，微动脉夹夹闭ICA，在CCA近动脉分叉处剪破一小口，插入栓线，栓线进深距CCA分叉处约18～20mm，松开微动脉夹，在ICA根部结扎，栓线的末端留在皮肤外，再灌注时从颈内动脉抽出栓线即可，栓塞性缺血2h分别再灌注0、0.5、1、2、4、6、24h。假手术组栓线进深为5mm，不插入颈内动脉。缺血后神经系统表现按