大鼠脑缺血再灌注模型的建立

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1、大鼠脑缺血再灌注模型的建立【关键词】脑缺血/再灌注;模型脑血管病具有发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高和并发症多的特点，是中、老年人致死和致残的主要疾病。缺血性脑血管病约占全部脑血管病人的70%～80%。因此建立稳定的、可重复、损伤小的大鼠脑缺血再灌注模型具有极其重要的价值。以往模型的建立〔1，2〕均缺乏详细操作过程及各操作细节的注意要点，因而建模的重复性和成功率相对较低。本文成功制备了大量SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，现介绍如下。　　1对象与材料　　1.1实验动物的选择由于SD大鼠具有成本低、种系纯合性好、抗感染能力较强，与人类的脑血管解剖

2、相似,以及与m直径的尼龙线、游标卡尺1把、持针钳1把。多聚L赖氨酸、戊巴比妥钠、速尿(20mg/支)、硫酸庆大霉素(80mg/支)等。　　1.3阻塞线的制备把0.2mm直径的尼龙盘线剪成6cm每段，一端靠近酒精灯火焰加热，并放于显微镜下观察，要求末端成光滑球面且直径不要大于0.30mm。过大者可能造成较难通过颈静脉孔，不光滑者可能刺破血管，导致蛛网膜下腔出血，且可引起血小板聚集和血栓形成，导致微血管循环的逐渐恶化。然后把合格的尼龙线放入0.1%的多聚L赖氨酸(1g多聚赖氨酸溶于1000ml蒸馏水中充分混匀)中浸泡过夜。目的是使其与血管壁黏着

3、紧密。　　2模型制作　　2.1麻醉取SD大鼠,称重,按雄鼠40mg/kg、雌鼠30mg/kg腹腔注射1%戊巴比妥钠麻醉。麻醉时一定要戴手套,以防止鼠咬伤,注射针一定要回抽,以防麻药直接进入血管而致动物死亡。由于个体差异等原因,麻醉剂量可能不足,此时可按雄鼠3mg/kg、雌鼠2mg/kg追加麻醉药,以达最佳麻醉效果。　　2.2器具准备把经消毒过的器械和绵签等整齐地放置于经消毒过的医用托盘上。　　2.3固定把大鼠仰卧并固定于手术台上，如果没有专门固定鼠的装置，把大鼠仰卧、四肢向两侧展开分别固定于铁钉上。固定一定要稳妥,否则因为麻醉效果不如意、手术不顺利

4、等原因大鼠剧烈活动而影响操作。　　2.4颈前部消毒剪去大鼠右颈前部的毛，尽量剪净，不要伤到鼠的皮肤,否则感染。先用棉签蘸取碘酒消毒鼠的颈前部皮肤两遍,再用棉签蘸取75%酒精消毒两遍。消毒时应从拟作手术切口处向两侧进行。　　2.5铺巾戴上经消毒过的医用口罩和手套,在经消毒过的阻塞线上用手术缝线打一活结。先后把两张有孔洞巾盖于鼠上并固定。有孔洞巾可用棉制白布剪成长约50cm、宽约40cm的方形巾,再于方形巾的前中部剪一长约4cm、宽约3cm的椭圆形孔洞。　　2.6作颈部旁切口在右侧颈前正线的外侧约0.5cm处画一长约2.5cm的直线标记，使切口整齐。让

5、助手轻提标记两侧的皮肤，用剪刀沿标记线剪开皮肤。作颈部旁切口，不用切开颈阔肌，出血少，便于肌肉分离，手术视野暴露较好，颈内、外动脉及其分支的分离易于进行。另外颈部旁侧入口对气管刺激性小，呼吸道分泌物少，不易出现呼吸道分泌物过多和气管痉挛。切开皮肤时动作要轻柔,避免引起出血,给手术操作带来一定难度，以刚刚切开皮肤为度;切口不能太靠外侧，否则会给分离肌肉带来难度。　　2.7寻找并分离相应血管切开皮肤和皮下组织，钝性分离二腹肌肌腹和胸锁乳突肌，寻找到颈动脉鞘，向颈动脉鞘滴少许5g/L普鲁卡因，以减轻或避免刺激颈动脉窦引起迷走减压反射而死亡。然后分离颈总动

6、脉和迷走神经，注意保护迷走神经节。在离颈动脉约0.8cm处结扎颈总动脉的近心端后向上分离右侧颈外动脉和颈内动脉。结扎颈外动脉,在颈内动脉的起始端放置一打好结的备用丝线，勿收紧线结。在手术显微镜下沿颈内动脉向下分离翼腭动脉。由于翼腭突动脉较粗且其走行方向与颈内动脉一致，在大多数情况下插线比较容易插入此分支而不能插入颅内，因此在其起始部置一小动脉夹备用。在插入阻塞线时，用小动脉夹暂时夹闭翼腭动脉，可有效防止阻塞线误入翼腭动脉，也可防止血管内血栓形成，保证再灌注时正常的血供〔4〕。　　2.8计算插入的阻塞线长度插入的阻塞线长度为2.0+18.0+0.2×

7、〔鼠实际重量(g)-250〕/10，单位为mm。其中2.0为“V”形切口距颈动脉分叉处的距离,18.0为颈动脉分叉处距大脑中动脉起始处距离,0.2×〔鼠实际重量(g)-250〕/10为修正值。但不同来源和批次的大鼠该公式要及时积累数据进行修正。取阻塞线，在距球面端按上述公式计算的长度处用丝线以死结拴牢。否则在插入阻塞线时因结的滑动而造成进入颅内的长度不精确。　　2.9栓塞右侧大脑中动脉用一把眼科剪轻垫于右侧颈总动脉末端的后方,用另一把眼科剪在颈离动脉分叉处0.20mm处剪一“V”形切口。注意血管应在自然状态下,以保证血管的自然长度。切勿牵拉,以防血

8、管扭曲;切口应位于血管的正前部。否则都会造成插线困难。一旦颈总动脉被剪开,助手应立刻适度牵拉右颈内动脉处的备用丝线关闭血管