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《brdu, cfse和gfp标记大鼠间充质干细胞的比较》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、BrdU,CFSE和GFP标记大鼠间充质干细胞的比较作者:付霞霏,何援利,杨芳,彭冬先,刘木彪【摘要】目的:研究BrdU,CFSE和GFP作为大鼠间充质干细胞标记物的可行性.方法:分别用上述三种标记物标记大鼠间充质干细胞,检测即时、15和30d的标记率,通过检测细胞周期、凋亡率和描绘生长曲线,来明确标记物对体外培养大鼠间充质干细胞生长特性的影响;通过流式细胞仪检测标记物对细胞表面标志(CD29,CD34,CD44,CD45)表达的影响.结果:BrdU,CFSE,GFP的即时标记率为77.0%,99.4%,89.7%,1mo后分别下降至51.9%,77.5%,82.9%.三者对体外培养
2、的大鼠间充质干细胞的生长特性和表面标志的表达均无明显影响.结论:GFP,BrdU和CFSE均可以作为大鼠间充质干细胞的标记物.【关键词】绿色荧光蛋白;溴脱氧尿嘧啶核苷;荧光染料CFSE;间充质干细胞 【Abstract】AIM:ToinvestigatethefeasibilityoflabelingofBrdU,CFSEandGFPaslabelsofratmesenchymalstemcells(MSCs)andtoinvestigatetheinfluenceofthe3markersonthegroarkersofratMSCs.METHODS:).ThelabeledMS
3、Csicroscope.CellcycleandapoptosisrateoflabeledMSCsarkerscastedaninfluenceonthecellgroore,thesurfacemarkers(CD29,CD34,CD44,CD45)ofthelabeledMSCsetryandmediatelabelingefficiencyofBrdU,CFSE,andGFPilartothatofnonlabeledMSCs.The3markersdidntinfluencetheexpressionsofsurfacemarkers(CD29,CD34,CD44,CD
4、45)ofratMSCs.CONCLUSION:The3markershavenoeffectsonthegroarkersofratMSCsculturedinvitro.BrdU,CFSEandGFPcanserveaslabelingmarkersofratMSCs.BrdUandCFSElabelingcanbeusedforshorttimetracing,andGFPlabelingforlongtimetracing. 【Keyesenchymalstemcells,MSCs)是定居于骨髓微环境中的一种成体干细胞.MSCs不仅能分泌多种细胞因子调节造血细胞的增生与分化
5、,还具有自我增殖、多向分化的潜能[1].因其采集方法简单、能在体外大量扩增、可自体移植避免免疫排斥和伦理问题,已成为组织修复的理想种子细胞和基因治疗的靶细胞[2].而寻找合适的标记方法用于追踪观察MSCs在实验研究中是很重要的.目前常用的标记方法包括:溴脱氧尿嘧啶(5bromodeoxyuridine,BrdU)、荧光染料(如二醋酸盐琥珀酰亚胺酯,5,6carboxyfluorescEindiacetatesuccinimidylester,CFSE)和绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotEIn,GFP)标记.我们从标记率、MSCs的生物学特性和表面标志的表达等
6、方面对这三种标记方法进行较全面的比较. 1材料和方法 1.1材料近交系SPF级6~8周龄EMF12培养基(Gibco公司),胎牛血清(Hyclone公司),CFSE(Sigma公司),BrdU(Sigma公司),小鼠抗BrdU抗体(Chemicon公司),山羊抗小鼠FITC(SantaCrutz公司),AdGFP(珠江医院妇产科构建),CCK8试剂盒(Dojindo公司),磷酸盐缓冲液(PBS,武汉博士德公司).CO2培养箱(Shell公司),荧光显微镜(Leica公司),流式细胞仪(BectonDickinson公司). 1.2方法 1.2.1大鼠MSCs的分离、
7、培养及扩增用100g/L水合氯醛麻醉大鼠后,无菌条件下取出胫骨和股骨,制备单细胞悬液,小心加入预先有密度为1.083的Percoll分离液的离心管内,两种液体体积比为1∶1.离心后,小心吸取中间界面乳白色的单个核细胞层,用PBS洗2次后加完全培养基(含100mL/L胎牛血清的DMEM/F12培养基)重悬,接种培养.待细胞铺满瓶底的80%~90%时,按1∶2传代.本实验中选用生长良好的第3代大鼠MSCs. 1.2.2BrdU标记方法及标记率的检测待细胞长至