brdu, cfse和gfp标记大鼠间充质干细胞的比较

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1、BrdU,CFSE和GFP标记大鼠间充质干细胞的比较作者：付霞霏，何援利，杨芳，彭冬先，刘木彪【摘要】目的:研究BrdU,CFSE和GFP作为大鼠间充质干细胞标记物的可行性.方法:分别用上述三种标记物标记大鼠间充质干细胞，检测即时、15和30d的标记率，通过检测细胞周期、凋亡率和描绘生长曲线，来明确标记物对体外培养大鼠间充质干细胞生长特性的影响；通过流式细胞仪检测标记物对细胞表面标志（CD29,CD34,CD44,CD45）表达的影响.结果:BrdU,CFSE,GFP的即时标记率为77.0%,99.4%,89.7%，1mo后分别下降至51.9%,77.5%,82.9%.三者对体外培养

2、的大鼠间充质干细胞的生长特性和表面标志的表达均无明显影响.结论:GFP,BrdU和CFSE均可以作为大鼠间充质干细胞的标记物.【关键词】绿色荧光蛋白；溴脱氧尿嘧啶核苷；荧光染料CFSE；间充质干细胞　　【Abstract】AIM:ToinvestigatethefeasibilityoflabelingofBrdU,CFSEandGFPaslabelsofratmesenchymalstemcells(MSCs)andtoinvestigatetheinfluenceofthe3markersonthegroarkersofratMSCs.METHODS:).ThelabeledMS

3、Csicroscope.CellcycleandapoptosisrateoflabeledMSCsarkerscastedaninfluenceonthecellgroore,thesurfacemarkers(CD29,CD34,CD44,CD45)ofthelabeledMSCsetryandmediatelabelingefficiencyofBrdU,CFSE,andGFPilartothatofnonlabeledMSCs.The3markersdidntinfluencetheexpressionsofsurfacemarkers(CD29,CD34,CD44,CD

4、45)ofratMSCs.CONCLUSION:The3markershavenoeffectsonthegroarkersofratMSCsculturedinvitro.BrdU,CFSEandGFPcanserveaslabelingmarkersofratMSCs.BrdUandCFSElabelingcanbeusedforshorttimetracing,andGFPlabelingforlongtimetracing.　　【Keyesenchymalstemcells,MSCs）是定居于骨髓微环境中的一种成体干细胞.MSCs不仅能分泌多种细胞因子调节造血细胞的增生与分化

5、，还具有自我增殖、多向分化的潜能［1］.因其采集方法简单、能在体外大量扩增、可自体移植避免免疫排斥和伦理问题，已成为组织修复的理想种子细胞和基因治疗的靶细胞［2］.而寻找合适的标记方法用于追踪观察MSCs在实验研究中是很重要的.目前常用的标记方法包括：溴脱氧尿嘧啶（5bromodeoxyuridine,BrdU）、荧光染料（如二醋酸盐琥珀酰亚胺酯，5,6carboxyfluorescEindiacetatesuccinimidylester，CFSE）和绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotEIn，GFP）标记.我们从标记率、MSCs的生物学特性和表面标志的表达等

6、方面对这三种标记方法进行较全面的比较.　　1材料和方法　　1.1材料近交系SPF级6~8周龄EMF12培养基（Gibco公司），胎牛血清（Hyclone公司），CFSE（Sigma公司），BrdU（Sigma公司），小鼠抗BrdU抗体（Chemicon公司），山羊抗小鼠FITC（SantaCrutz公司），AdGFP（珠江医院妇产科构建），CCK8试剂盒（Dojindo公司），磷酸盐缓冲液（PBS，武汉博士德公司）.CO2培养箱（Shell公司），荧光显微镜（Leica公司），流式细胞仪（BectonDickinson公司）.　　1.2方法　　1.2.1大鼠MSCs的分离、

7、培养及扩增用100g/L水合氯醛麻醉大鼠后，无菌条件下取出胫骨和股骨，制备单细胞悬液，小心加入预先有密度为1.083的Percoll分离液的离心管内，两种液体体积比为1∶1.离心后，小心吸取中间界面乳白色的单个核细胞层，用PBS洗2次后加完全培养基（含100mL/L胎牛血清的DMEM/F12培养基）重悬，接种培养.待细胞铺满瓶底的80%~90%时，按1∶2传代.本实验中选用生长良好的第3代大鼠MSCs.　　1.2.2BrdU标记方法及标记率的检测待细胞长至