雷公藤多甙对佐剂性关节炎大鼠l5 drg内sp、cgrp表达的影响

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1、雷公藤多甙对佐剂性关节炎大鼠L5DRG内SP、CGRP表达的影响【摘要】ObjectiveToexploretheeffectsofpolyglycosidesofTripterygiumethodsAdjuvantArthritisratsberandpercentageofSP、CGRPpositiveneuronsamongtotalneuronsinbilateralDRG(L5).ResultsSP、CGRPexpressioninneuronsofL5DRGinbilateralsidei

2、nTⅡpreventivegroupandtherapeuticgroupdecreasedapparentlyasparedodelgroup.ConclusionTⅡmayplayapreventiveandtherapeuticrolebydecreasingtheexpressionofSPandCGRPinL5dorsalrootganglion.【关键词】polyglcosidesofTripterygiumatoidarthritis，RA）是一种常见的自身免疫性疾病，多种细胞因子和炎症

3、介质参与了RA发病，引起滑膜细胞增生、致炎、软骨破坏、关节畸形；此外，神经递质也参与了上述病变过程并且与疼痛传导有关。类风湿关节炎滑膜腔中有多种神经递质：如P物质（substanceP，SP）、降钙素基因相关肽（Calcitoniongenerelatedpeptide，CGRP）、神经肽Y(NeuropeptideY，NPY)。SP、CGRP等神经递质主要在脊神经节的初级感觉神经元胞体内合成，当关节炎发生时，其合成也发生相应变化。这些神经递质释放到关节腔后，能够与相应受体结合，引起关节内环境改变，介

4、导神经源性炎症反应。中药雷公藤多甙（polyglycosidesoftripterygiumofa公司产品）0.2ml，不给药物治疗；C组（TⅡ预防组，TⅡ为湖南株州制药三厂产品）造模方法同模型组，造模后第7天开始灌胃给予TⅡ，用药剂量以大鼠体表面积换算公式计算，即1/d，TⅡ30mg·kg-１/次，共7天；D组（TⅡ治疗组）造模方法同模型组，造模后第19天开始灌胃给予TⅡ，1/d，TⅡ30mg·kg-1/次，共7天。2.2灌注和取材造模28d灌注固定后取材，取双侧L5DRG后固定12h，分别经50%

5、、60%、70%、80%、90%、95%、100%梯度酒精脱水各30min，入氯仿Ⅰ、氯仿Ⅱ各透明30min，石蜡包埋后用石蜡切片机连续切片，片厚7μm，各组每例L5DRG等距离间隔取片，取片2组,每组5纵带（每带3张），分别用SP、CGRP抗体进行免疫组织化学染色。2.3免疫组织化学染色用SP法做L5DRGSP、CGRP免疫组化染色。2.4免疫组化对照实验空白对照：用0.05mol/LPBS代替一抗，其余步骤不变。置换实验：用正常羊血清代替一抗，其余步骤不变。2.5免疫组化阳性细胞计数显微镜下观察S

6、P、CGRP免疫阳性细胞在L5DRG的分布情况，计数每例动物每张切片上所有可见细胞核的阳性细胞和阴性细胞数。求出5例动物阳性细胞均数作为该组动物SP、CGRP的阳性细胞数,5例动物阳性细胞和阴性细胞之和的均数作为该组动物L5DRG细胞总数，分别计算出SP、CGRP阳性细胞占细胞总数的百分比。2.6统计学处理数据均采用均数±标准差（x±s）表示。应用SPSS11.0for.4讨论人们早就发现，SP、CGRP等神经肽参与了RA中神经源性的炎症反应。这些神经肽主要在背根节神经元胞体内合成，当发生关节炎时，其

7、合成会发生改变。Smith等发现关节炎时原发病变侧背根节内SP阳性神经元增加了70%［2］；在FCA诱导的AA模型中，发现炎症诱导后5dL4-L6DRG内SP含量增加了30%～40%［3］；在单关节炎大鼠中，背根节内SP的前体物质PKAmRNA水平增加［4］。在对关节炎动物模型的研究中还发现向关节腔内注射佐剂后30min，即可检测到相应脊髓节段脊神经节神经元内CGRPmRNA增多［5］。李文武等发现，在FCA注射后14d动物形成多发性关节炎时，用原位杂交方法检测到L5DRG内CGRPmRNA增多［6］

8、。上述研究结果表明，当发生关节炎时，相应节段DRG中神经肽的合成增加。这类神经元发出一个通向脊髓的中枢突和另一个支配下肢关节滑膜的周围突，电生理研究发现后者主要是无髓的C类纤维，在正常情况下无髓C类纤维是静止的［7］。一旦关节腔内发生炎症反应，炎症介质可刺激该类纤维末梢，不仅能向胞体传导一个痛觉冲动，还能通过轴突反射向关节腔中释放神经递质，例如SP、CGRP等。神经递质释放到关节腔后，通过与相应的受体结合而引起血管扩张、组织水肿，还能刺激肥大细胞产生组织