hplc测定结核灵片中狼毒乙素的含量

《hplc测定结核灵片中狼毒乙素的含量》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、HPLC测定结核灵片中狼毒乙素的含量【摘要】　　目的建立测定结核灵片中狼毒乙素含量的方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为AgilentHCC18,流动相为甲醇水（体积比70∶30），流速1.0mL/min，检测波长291nm，柱温为室温。结果狼毒乙素质量浓度在0.606～7.278μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9998；平均回收率为100.20%，RSD为0.29%（n=6）。结论本方法简便、准确，可用于测定结核灵片中狼毒乙素的含量。【关键词】结核灵片狼毒乙素HPLC　　结核灵片收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十三册中，由狼毒药材（

2、大戟科植物月腺大戟EuphorbiaebracteolataHayata及狼毒大戟EuphorbiafischerianaSteud.的根）经煎煮提纯而成，主治淋巴结核，对肺结核及其他淋巴结核亦有疗效［1］。该标准采用紫外分光光度法测定结核灵片中的狼毒乙素含量。本文建立了高效液相色谱法的外标法，结果表明本文方法简便、准确、可靠，可作为该制剂的含量测定方法。　　1仪器与试药　　SHIMADZU岛津LC2010A高效液相色谱仪，CLASSVP色谱数据工作站；SartoriusBP211D电子分析天平；JL180DTH超声波清洗器。　　结核灵片（江门市恒健药业有限

3、公司提供，批号：070701、071101、080201、080501、080801、081001）。狼毒乙素对照品（由江西万基药物研究院有限责任公司提供，纯度≥99.9%，批号：461130601）；甲醇（天津四友，色谱纯）；水为双蒸馏水（自制），其余试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1供试品溶液的制备　　取结核灵片20片，精密称定总质量，求得平均片质量，研细至粉末，取约1g，精密称定，置50mL量瓶中，加水5mL，振摇使成稠膏，加入甲醇35mL，摇匀，超声20min，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液,即得。　　2.2

4、阴性样品的制备　　用密度为1.32～1.36(60～65℃)的淀粉浆代替清膏，按结核灵片的生产工艺及供试品溶液的制备方法制备，即得。　　2.3对照品溶液的制备　　精密称取狼毒乙素对照品0.01213g，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为狼毒乙素对照品储备液（121.3μg/mL）。再精密量取2mL，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为狼毒乙素对照品溶液（2.426μg/mL）。　　2.4色谱条件　　色谱柱为AgilentHCC18（4.6mm×250mm，5μm，安捷科技公司）；柱温室温；流动相为甲醇水（体积比70∶30）

5、；流速为1.0mL/min；检测波长为291nm，进样量为20μL；在该色谱条件下，理论板数按狼毒乙素计算大于2000，狼毒乙素与杂质峰可达基线分离，分离度大于1.5。色谱图见图1。　　2.5标准曲线的绘制　　分别精密吸取上述对照品储备液（121.3μg/mL）0.5、1.0、2.0、4.0、6.0mL，分别置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得质量浓度为0.606、1.213、2.426、4.852、7.278μg/mL的系列溶液。分别精密吸取20μL进样，按上述色谱条件测定，记录色谱图。以狼毒乙素质量浓度（ρ）为横坐标，狼毒乙素峰面积（A）为纵

6、坐标作图，得回归方程：A=158577ρ-5459.2,r=0.9998(n=5)。结果表明狼毒乙素质量浓度在0.606～7.278μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。　　2.6重复性试验　　　　取同一批结核灵片(批号070701)，按“2.1”项下制备方法平行制备6份供试品溶液，分别依法进样，测得峰面积并计算含量，结果测得平均含量为0.01439%，RSD为0.34%。　　2.7稳定性试验　　　　取供试品溶液20μL，分别在0、2、5、7、10、12h进样，共测5次，结果测得狼毒乙素含量的RSD值为0.31%，表明供试品溶液在12h内测定稳定。　　2.8回收率

7、试验　　取同一批结核灵片(批号070701)粉末1g，精密称定，共6份，分别置50mL量瓶中，精密加入狼毒乙素对照品储备液（121.3μg/mL）2mL，按“2.1”项下方法制备溶液，并进样测定，计算平均回收率为100.20%,RSD为0.29%（n=6）。见表1。　　A.狼毒乙素对照品;B.供试品;C.阴性对照样品　　图1结核灵片高效液相色谱图（略）　　Figure1HPLCchromatogramsofZiehelingpills　　表1狼毒乙素加样回收率试验结果（略）　　Table1Resultsofrecoverytest　　2.9含量测定及含量限度　　分

8、别精密称定