hplc法测定益肝灵片中水飞蓟宾的含量

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1、HPLC法测定益肝灵片中水飞蓟宾的含量【关键词】益肝灵片；水飞蓟宾；高效液相色谱法Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentofsilybininYiganlingtablets.MethodsAnHPLCmethodaDiamonsilC18column.Themobilephaseconsistedofmethanol1%aceticacid（49∶51）.ThefloL·min-1andthedetection.ResultsThelinearrangesofsilybinL-1（r=0.9999）ethodisconvenient,rapida

2、ndreproducible，eleon化学工作站;紫外分光光度计（日立U3210）；SK7200H型超声波清洗器（上海科导超声仪器厂），工作频率59kHz，输出功率350g/片）。甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为高纯水。2方法与结果2.1溶液的制备2.1.1对照品溶液的制备精密称取105℃干燥3h后的水飞蓟宾对照品约10.34mg，置50mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理20min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（质量浓度为206.8μg·mL-1）。2.1.2供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于水飞蓟宾10mg），置50mL量瓶中

3、，加甲醇适量，超声处理20min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀；精密吸取上清液5mL至25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm滤膜过滤，作为供试品溶液。2.1.3阴性对照液的制备根据处方配制阴性对照品，按“2.1.2”项方法处理得阴性对照液。2．2测定方法由于水飞蓟宾对照品和供试品中都同时含有水飞蓟宾和异水飞蓟宾，因此按外标法以水飞蓟宾与异水飞蓟宾峰面积之和计算。2.3色谱条件及系统适用性试验色谱柱为DikmaDiamonsilC18（250mm×4.6mm，5μm，迪马公司）；流动相：甲醇1%冰醋酸溶液（体积比49∶51）；流速：1.0mL·min-1；检测波长：288nm；

4、柱温：30℃。分别取对照品溶液（水飞蓟宾质量浓度为12μg·mL-1）、供试品溶液和阴性对照溶液20μL注入色谱仪，理论板数以水飞蓟宾计算应不低于4000；水飞蓟宾的拖尾因子为0.94，保留时间约为25min，水飞蓟宾和异水飞蓟宾与其相邻色谱峰的分离度大于1.5；阴性样品不干扰样品测定，见图1。2.4方法学考察2.4.1标准曲线的制备分别吸取一定量的水飞蓟宾对照品贮备液，加甲醇稀释成水飞蓟宾质量浓度为20.68、31.02、41.36、51.70、62.04、82.72μg·mL-1的溶液。依次进样20μL，每个浓度测定3次以上。以峰面积（A）对对照品溶液质量浓度（ρ）进行回归，得水飞蓟宾回

5、归方程为A=667.95ρ+0.11，r＝0.9999。表明水飞蓟宾质量浓度在20.68～82.72μg·mL-1之间与峰面积线性关系良好。2.4.2精密度试验取质量浓度为41.36μg·mL-1的水飞蓟宾对照品溶液20μL，连续测定5次，其峰面积的RSD值为2.0%，表明仪器精密度良好。2.4.3稳定性试验取供试品溶液（批号：070303）在0、2、4、6、8、12、24h分别进样20μL，记录峰面积，结果峰面积的RSD为1.1%，表明供试品溶液在24h内稳定。2.5样品测定取益肝灵片3批，照“2.1.2”方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液（12μg·mL-1）与供试品溶液各10μ

6、L，注入液相色谱仪，测定，计算样品中水飞蓟宾的含量，结果见表2。表2样品中水飞蓟宾测定结果3讨论3.1最大吸收波长的选择　　取对照品溶液在200～400nm范围内进行扫描，结果在288nm处有最大吸收，故确定检测波长为288nm，见图2。3.2流动相的选择　　曾试用甲醇0.05moL/L磷酸二氢钾溶液（0.2moL/L磷酸调节pH值4.0）［3］、甲醇0.02%冰醋酸溶液［4］和甲醇1%冰醋酸溶液［5］为流动相，并比较不同比例流动相对分离的影响，结果以甲醇1％冰醋酸溶液（体积比49∶51）为流动相时的峰形较好，分离度较高。3.3提取时间的考察　　考察超声提取10、15、20、25、3

7、0min对提取率的影响，结果表明，超声提取20min含量达稳定，时间增加，含量不会增加。因此选择甲醇为溶剂，超声提取20min。3.42种含量测定方法比较理论含量根据原料水飞蓟素的含量和理论投料量计算得出。原料水飞蓟素的含量测定方法包括紫外分光光度法测定水飞蓟素（总黄酮）含量，结果以水飞蓟宾计算，不得少于68％；以及高效液相色谱法测定水飞蓟宾的含量，结果含水飞蓟宾和异水飞蓟宾不得少于30％。2种方法测定结果比