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1、HPLC法测定复方益肝灵片中水飞蓟宾的含量论文.freel。结果水飞蓟宾在0.2380～2.380μg范围内线性关系良好,其回归方程为：Y＝2.146×106X＋1.818×103,r＝0.9999,平均加样回收率为98.17%,RSD＝1.3%。结论该方法简单、准确、重复性好,可作为复方益肝灵片的质量控制方法。【关键词】高效液相色谱法；复方益肝灵片；水飞蓟宾DeterminationofSilybininFufangYiganlingTabletbyHPLCGUHai-feng,ZHANGXiao-qian,CHANGZeng-rong,etalBeijingInstitu
2、teforDrugControl,.freelethodforthedeterminationofsilybininFufangYiganlingtablet.MethodsRP-HPLCobilephaseethanol-.ResultsThecalibrationcurveofSilybinethodissimple,accurateandm×250mm,5μm),流动相：甲醇-水-冰醋酸(48∶52∶1),流速：1.0mL/min,检测波长：286nm,柱温：40.0℃。分离度(R)：大于1.5,色谱柱的理论板数按水飞蓟宾峰计算,应不低于3000。色谱图见图1。2.1.
3、2对照品溶液的制备精密称取水飞蓟宾对照品12mg,置50mL量瓶中,加甲醇适量使溶解并稀释至刻度,摇匀；精密量取5mL,置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得(每1mL中含水飞蓟宾120μg)。2.1.3供试品溶液的制备取本品20片,除去糖衣,精密称定,研细,取0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加75%甲醇50mL,密塞,称定重量,加热回流30min,取出,放冷,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。2.1.4阴性空白溶液的制备按处方比例,取不含水飞蓟素的样品0.3g,精密称定,按“2.1.3”项下方法操作,制
4、备阴性空白溶液。2.1.5测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,以水飞蓟宾两个峰面积之和计算,即得。2.2方法学考察及结果2.2.1线性关系考察精密量取水飞蓟宾对照品溶液(119.0μg/mL),分别进样2.0、4.0、6.0、10.0、20.0μL,注入液相色谱仪,记录峰面积。以水飞蓟宾对照品进样量为横坐标,峰面积值为纵坐标,绘制标准曲线。其回归方程为：Y＝2.146×106X＋1.818×103,r＝0.9999。结果表明,水飞蓟宾对照品在0.2380～2.380μg范围内线性关系良好。2.2.2稳定性试验精密吸取同一供试品溶液(批号0
5、70304),分别于配制后0、1、4、8、15、24h进样10μL,依法测定。结果RSD＝0.66%,表明供试品溶液在24h内基本稳定。2.2.3精密度试验精密吸取同一供试品溶液(批号070304),按供试品溶液制备方法制备,进样10μL,重复进样5次,求得RSD＝0.09%。2.2.4重复性试验按“2.1.3”项下方法制备,对同一批样品(批号070304)6份进行测定,求得RSD＝1.0%。2.2.5回收率试验采用加样回收法。精密称取已知含量的同一批号的样品(批号为070304,含量为17.50mg/g)0.15g,精密加入水飞蓟宾对照品(0.05634mg/mL)的75%
6、甲醇溶液50mL,按“2.1.3”项下方法制备及“2.1.1”项下色谱条件及系统适应性试验测定,计算回收率。结果见表1。表1复方益肝灵片中水飞蓟宾加样回收率试验结果（略）2.2.6样品测定结果精密吸取“2.1.2”项下对照品溶液和“2.1.3”项下供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定3批样品(批号070304、070308、070311),结果见表2。表2样品中水飞蓟宾含量测定结果（略）2.2.7阴性空白试验精密吸取“2.1.4”项下的阴性空白溶液10μL,注入液相色谱仪,结果空白溶液在与水飞蓟宾对照品相同保留时间处未显色谱峰,故认为无干扰。3讨论3.1流动相的选择根据
7、文献,流动相曾采用甲醇-水-0.5mol/L磷酸二氢钾溶液(10∶10∶12、26∶24∶2.5)3、甲醇-水(45∶55)4、甲醇-水-乙腈-磷酸(45∶50∶5∶0.55、44.5∶50∶5∶0.3)6,结果采用甲醇-水-冰醋酸(48∶52∶1)7流动相分离效果最好。3.2检测波长的选择取水飞蓟宾对照品溶液10μL,注入液相色谱仪,用二极管阵列检测器在200～400nm波长范围检测,结果在286nm波长处有最大吸收,故采用286nm作为检测波长。3.3提取溶剂的选择以不同含量的甲醇、乙醇为溶剂,采用
