水飞蓟悬浮培养体系的建立及不同诱导子对水飞蓟宾含量的影响

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1、分类号：R282单位代码：10193密级：公开学号：2012175硕士学位论文水飞蓟悬浮培养体系的建立及不同诱导子对水飞蓟宾含量的影响EstablishmentofSilybummarianumcellsuspensionculturesystemandeffectsofdifferentinducersonsilybincontent作者姓名：姜鸿运学位类别：医学硕士专业名称：中药学研究方向：中药生物技术指导教师：杨世海所在学院：中药材学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我

2、所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学

3、校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要水飞蓟Silybumrnarianum(L)Daertn.是菊科（Asteraceae）菜蓟族（Cy

4、nareaeLess）水飞蓟属（Silybum）1～2年生草本植物。原产于欧洲，非洲，地中海地区。喜阴凉、干爽、干燥气候，对生长环境要求不严格，荒山、肥料差的地区均可生长，适应性强。一般春季采叶，夏季收种。水飞蓟性寒，味苦，是优良的护肝植物，广泛应用临床肝病的治疗。除了具有保肝作用外，亦表现出其他多种药理学作用，如保护脑神经系统、保护心肌细胞、保护皮肤、抗炎以及良好的抗肿瘤作用。随着临床应用需求不断上升，野生资源日益匮乏及栽培品种的退化，水飞蓟供不应求。植物组织培养能够缓解水飞蓟短缺的现状，但是目前没有真正有效的植物组织培养的生物反应器。本实验

5、通过培养水飞蓟叶片外植体，获得愈伤组织并进行大批量培养。在此基础上进行水飞蓟悬浮培养条件优化，最终确定了水飞蓟悬浮培养的最佳条件：MS液体培养基、光照培养12h/d、pH=7、110r/min、培养20d、激素配比为6-BA1.5mg/L＋NAA1.0mg/L＋ZT1.5mg/L，悬浮细胞结构疏松，颜色淡黄色，培养基干净清亮，细胞分成小颗粒状。在建立水飞蓟悬浮培养体系中进行诱导子添加，测定水飞蓟悬浮细胞增长量及水飞蓟宾的含量。水飞蓟原植物、固体愈伤组织、未添加诱导子的液体悬浮培养中的水飞蓟宾含量分别为0.046%、0.349%、0.501%。与

6、他们相比，硝普钠的添加不仅利于悬浮细胞的增重，对于水飞蓟宾的积累同样有效，硝普钠浓度为1.00mmol/L时，水飞蓟悬浮细胞的增长量最大，达到12.24g，水飞蓟宾含量达到0.686%。其次为壳聚糖，浓度为3.00mmol/L时，水飞蓟悬浮细胞的增长量为11.73g，水飞蓟宾含量为0.616%。水杨酸对水飞蓟悬浮细胞产生负调控，水飞蓟悬浮细胞的最大增长量为5.32g，水飞蓟宾含量仅有0.146%。悬浮培养中水飞蓟宾的含量是固体愈伤组织的1.43倍，硝普钠组的水飞蓟宾含量是未添加诱导子液体培养基中含量的1.36倍，是固体愈伤组织的1.96倍。可见

7、悬浮培养对于水飞蓟细胞的增重及次生代谢产物均有良好的富集作用。本研究考察了不同影响因素对水飞蓟悬浮培养的作用，确定了水飞蓟悬浮培养体系，并进行优化。在此基础上添加不同诱导子，增加了水飞蓟悬浮培养细胞中次生代谢产物的积累，为水飞蓟悬浮培养提供理论依据。关键词：水飞蓟；悬浮培养；水杨酸；壳聚糖；硝普钠；水飞蓟宾IAbstractSilybumrnarianum(L)Daertn.isan1-2annualherbofSilybum,CynareaeLess,Asteraceae.ItwasoriginallyplantedinEurope,Afri

8、ca,andtheMediterraneanregion.Theherblikesacoolanddryclimateandisnotstrictin