水飞蓟宾纯化工艺研究

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1、水飞蓟宾纯化工艺研究李世凯吴晓霞吴晓云(盘锦天源药业有限公司124000)?【摘要】水飞蓟属于一年或二年生菊科草木植物，其提取主要成分水飞蓟素有着很广泛的应用，尤其是医学方面意义重大。以往水飞蓟素主要用于肝炎、胆囊炎中，但随着对其研究越来越深入，发现其除了对肝细胞有修复作用，同时还能对乳腺癌、前列腺癌、子宫癌细胞生长与分化产生抑制作用，此外对于皮肤过敏、牛皮癣等也有很好的效果，故而可用于美容方面。水飞蓟素主要活性成分当属水飞蓟宾，为了提高其应用效果，就应提高水飞蓟宾的纯化工艺，本文对此进行探讨。【关键词】水飞蓟水飞蓟素水飞蓟宾纯化工艺【中图分类

2、号】R931.71【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2014)11-0168-02水飞蓟也称为老鼠筋、水飞雉等，属于菊科类植物，高1.2米左右，种子可入药，原产地为西欧与北非，近几年我国陕西、黑龙江、甘肃等地有了广泛的栽培。研究显示水飞蓟属于优良的护肝植物，其主要成分为水飞蓟素，对于肝炎、胆囊炎等有很好的疗效，并且目前在美容、抗癌等方面也有了一定的应用。水飞蓟素主要活性成分为水飞蓟宾，要想得到该成分，就必须先将水飞蓟素提取出来,然后加以纯化。关于水飞蓟素的提取方法很多，包括乙酸乙酯提法与醇提法及超声波法等，而水飞蓟宾的纯化方法不同

3、，则会得到不同的纯度。有研究显示，采用甲醇等有机溶剂纯化水飞蓟宾，所得的样品经过紫外线检测并无杂质峰，而纯度可达到97%及以上，从而可以有效分离与纯化水飞蓟宾，但是该类试剂的缺点在于毒性很强。为此，就需要不断研究与探索，寻找更好的纯化方法，木文针对聚酰胺柱层析结合乙醇■水洗脱进行了分析，认为安全性很高，同时经HPLC检测可知，纯度能达到98%o希望通过木次研究探讨，能对相关研究产生借鉴作用。1仪器和材料及试剂水飞蓟宾纯化之前应先进行水飞蓟素提取，故而需要的仪器与材料包括：电子天平（如METTLERTOLEDOEL-240万分之一型）、超声波清洗

4、器（如昆山超声仪器有限公司生产的KQ-100DE型）、紫外可见分光光度计（如ShimadzuUV-2401PC型）、高效液相色谱仪（如DIONEXultimate3000型）。实验仪器：美国SSI-PC2000高效液相色谱仪，Model3860型超声波清洗脱气机,PHii（PHS-2C）,电子天平（JD100-3）,电热恒温水浴锅，旋转蒸发仪（R201C）等。此外，需要的试剂则包括水飞蓟种子榨油后剩余的残渣、水飞蓟对照品、分析纯（甲醇、95%乙醇、醋酸乙醇、丙酮、100目聚酰胺粉末、聚酰胺薄膜等）。2水飞蓟素提取方法2.1有机溶剂提取法称取4份

5、（每份20g）水飞蓟种子榨油后剩余的残渣，分别加入各自100ml的甲醇、乙醇、醋酸乙酯及丙酮溶液中，密封塞紧后，浸泡过夜，经超声波法提取45分钟后过滤，将滤渣加入到前述相应溶剂中再次提取，将两次滤液合并，放于60°C中浓缩并烘干，最后得到水飞蓟提取物，称重并记录。2.2碱提酸沉法称取5g水飞蓟种子榨油后剩余的残渣，根据预试验结果加入25ml的0.5mol/L的NaOH溶液中，经超声波法提取45分钟，并进行离心处理，离心时间0.5小吋，离心速率为每分钟4000r,离心完毕取其上清液，而残渣则再次提取一次，合并两次上清液后，根据预测结果，将溶液pH

6、调整到pH二3,再次离心，取其沉淀物，并放于60°C行烘干处理，完成后对提取物进行称重并记录。3含量测定方法3.1水飞蓟素测定将水飞蓟宾对照品称取6.1mg后，利用80%乙醇进行定容到50ml为止，从而配置岀水飞蓟宾对照品母液，将其稀释为不同浓度，之后采用分光光度法进行测定，测定其288nm处的吸光值，并根据所得作标准曲线。采用同样的方法称取不同方法所得的水飞蓟提取物lOOmg,加入80%乙醇后行超声波辅助溶解→过滤→定容（50ml）,所得液体为提取物母液，将其稀释50倍后行全波长扫描，同样记录288nm的吸光值，并根据标准

7、曲线来计算出提取物的水飞蓟素含量。3.2水飞蓟宾测定水飞蓟宾含量的测定方法选用HPLC测定法，高效液相柱为Arichrombond-C18,而流动相设置为甲醇：甲酸■水=47：53,检测的波长设定为288nm,柱温控制在35°C,分别取对照品与母液，进样的体枳为5μl,根据对照品出峰吋间与峰面积，从而计算出水飞蓟宾含量。4水飞蓟宾纯化方法称取前述采取甲醇提取的水飞蓟种子榨油后剩余的残渣所得的物品4g,装入聚酰胺柱（®xL二5cm×47cm）,先利用丙酮冰溶液（浓度50-80%）进行梯度洗脫，同时合并浓缩70-75%洗脱部分；浓

8、缩所得物品上聚酰胺柱（①xL二2.5cm×40cm）,彳亍乙醇■水溶液（浓度30〜95%）梯度洗脱，同口寸合并浓缩70%乙醇洗脱部分，并重