il21调节免疫平衡对大肠癌细胞生长的抑制作用

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1、IL21调节免疫平衡对大肠癌细胞生长的抑制作用张振亚张伟陈学谦安广权单保恩于跃明【摘要】目的观察大肠癌患者和接种Colon26细胞小鼠的Th1/Th2平衡偏移情况，同时以IL21调整小鼠Th1/Th2平衡，观察调节细胞免疫平衡对大肠癌的影响。方法随机选取30例大肠癌患者，采用流式细胞仪测定Th1/Th2细胞比值及血清中IFNγ和IL4浓度。另于小鼠爪垫内侧皮下接种高分泌IL21的Colon26/IL21细胞，对比观察小鼠肿瘤生长情况及对机体免疫平衡状态的影响。结果①30例大肠癌患者和30例正常人Th1/Th2比值分别为0.74±

2、0.27和1.26±0.9；血清IFNγ浓度的测定值分别为（6.26±1.43）和（9.18±2.31）pg/ml；IL4浓度的测定值分别为（8.88±1.30）和（5.20±1.71）pg/ml；IFNγ/IL4比值的测定值分别为0.70±0.10和1.82±0.35，两者差异明显。②接种Colon26/IL21细胞组小鼠肿瘤持续生长至16d后逐渐缩小，小鼠血清中IFNγ浓度明显高于对照组；接种Colon26细胞组小鼠肿瘤持续生长增大，血清中IL4浓度高于Colon26/IL21细胞组；免疫平衡向细胞免疫方向转变。结论大肠

3、癌患者与正常人相比细胞免疫功能下降，免疫平衡（Th1/Th2平衡）向Th2型偏移；IL21可以增强Th1型细胞免疫功能，调节Th1/Th2细胞比例，纠正免疫失衡，有效发挥杀灭肿瘤细胞。【关键词】免疫平衡；IL21；大肠癌；Colon26细胞　　恶性肿瘤的发生发展常与机体的免疫功能低下有关，调节肿瘤患者机体免疫平衡，增强其细胞免疫功能有助于改善治疗效果。白介素21（IL21）主要由活化的CD4+T细胞分泌的Ⅰ型细胞因子，能够促进T细胞、NK细胞、树突细胞的增殖、分化并能提高NK细胞的杀伤活性，加强机体细胞免疫功能。本研究旨在通过流式细胞

4、学和ELISA方法对比观察大肠癌患者与正常人之间免疫功能的差异；并通过调节机体分泌IL21水平，观察免疫平衡状态的变化以及抑制肿瘤生长的作用。　　1资料与方法　　1.1临床实验标本的采集　　随机选取本院院外科经病理证实的住院结肠癌患者30例，其中男17例，女13例，年龄29～74岁，中位年龄为61岁，病例排除标准：①无应用任何免疫制剂；②肠梗阻合并白细胞升高；③无合并其他部位感染；④伴乙型肝炎、类风湿关节炎、甲状腺功能亢进等与免疫相关的疾病；对照组30例均为健康人，男17例，女13例，年龄28～70岁，中位年龄为63岁，与大肠癌患者在性别

5、、职业、年龄等方面均具有可比性（P＞0.05）。标本采集均为空腹静脉血。血标本分成两部分：A用促凝管采血1ml，1500r/min离心10min，提取血清，80℃保存备用；B用EDTAK2抗凝的无菌试管采血1ml，采血后即刻送实验室进行实验。　　1.2实验动物、细胞株　　清洁级Balb/c雌性小鼠共90只，体重25g左右,均购自河北医科大学实验动物中心（合格证编号：701147）。小鼠结肠低分化腺癌Colon26细胞株、转染IL21基因的Colon26细胞株（Colon26/IL21细胞）由本院科研中心单保恩教授惠赠。　　1.3主要

6、仪器及试剂　　EpicsXLⅡ型流式细胞仪，NU400400E超净工作台，倒置显微镜，高速低温离心机，CHIBITANⅡ型微量离心机，凝胶成像分析系统，UV2201型紫外分光光度计，DFCII型电泳仪，80℃超低温冰箱，PCR扩增仪，酶联免疫检测仪。人IFNγ、IL4、小鼠IFNγ、IL4定量ELISA试剂盒由晶美生物工程有限公司（北京）提供；FITC标记的抗CD4单抗（CD4FITC）、PE标记的抗IL4单抗（IL4PE）、PE标记的抗IFNγ单抗（IFNγPE）、佛波醇乙酯、离子霉素、蛋白转运抑制剂由

7、美国BD公司提供；0.1%TritonX100由美国Sigma公司提供；RPMI1640培养基由Gibco公司提供；Trizol由Invitrogen生物技术公司提供；RTPCR酶混合物由华美生物工程公司提供；小鼠IL21基因上、下游引物由华美生物工程公司合成，上游引物为5’GAGGACCCTTGTCTGTCTGG3’，下游引物为5’TCATCTTTTGAAGGAGCCATTT3’；DNAMarker由北京鼎国生物公司提供。　　1.4结肠癌患者外周血Th1、Th2细胞检测　　取患者抗凝血1ml，以PMA、离子霉素为刺激原，加

8、蛋白转运抑制剂后培养，裂解红细胞后洗涤后弃上清，CD4FITC单抗标记洗涤，加4%多聚甲醛固定，0.1%TritonX100缓冲液破膜加入IFNγPE、IL4PE，