rn181调节大肠癌细胞生长及其分子机制的研究

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文RNl81调节大肠癌细胞生长及其分子机制的研究RoleofRNl81ingrowthofcolonrectalcancercellsanditsmechanism课题来源：国家自然科学基金(81171959)学位申请人导师姓名张贤李纪良专业名称肿瘤学培养类型学术型培养层次硕士研究生所在学院生物技术学院2014年5月lO日广州硕士学位论文{洲删咖删Ⅲ籼删删il{iimY2617979IⅢ181调节大肠癌细胞生长及其分子机制的研究硕士研究生：张贤指导老师：李纪良教授摘要背景：大肠癌包括结肠

2、癌和直肠癌，是指大肠黏膜上皮在环境或遗传等多种致癌因素作用下发生的恶性病变，好发于直肠与乙状结肠交界处。消化系统常见的恶性肿瘤大肠癌，也是全世界常见的恶性肿瘤之一，在我国，大肠癌的发病率在消化道肿瘤中仅次于胃癌和食管癌，其发病率位于世界肿瘤发病率的第三位。随着人们生活条件和饮食习惯的改变，大肠癌的发病率和死亡率呈明显上升趋势，死亡率已位居恶性肿瘤第5位。根据世界卫生组织2004年的统计，在全球排名前20的死亡原因中大肠癌排名第20位，我们推测至2030年大肠癌排名上升到第14位。大肠癌的真正病因虽然尚未明确，但是对其发

3、病的危险因素已经有较深入的研究大肠癌的高危因素主要有以下几个方面：1)饮食因素，2)遗传因素3)大肠息肉、炎症性肠病等，这些疾病大肠癌发病率明显增加4)吸烟、饮酒。5)幽门螺旋杆菌6)社会心理因素，长期精神压抑、环境不适应、不能自我调节不良情绪、焦虑和应激反应强等C型行为模式认为是癌症的易感行为模式。大肠癌被认为是多因素、多阶段，各种分子事件发生发展而形成的。这些因素可归纳为内源性及外源性2大类：外因包括理化与生物源性因素，内因包含遗传或获得性的基因不稳定，微卫星不稳定以及染色体不稳定。总的来说，肠癌的发生与基因突变，

4、以及蛋白质、酶水平变化及其翻译修饰中磷酸化乙酰、化或糖基化作用有关。这些失调现象的积累，导致了肠癌的发生。因此摘要有必要揭示与理清这些过程中基因突变及蛋白的失调的原因，为进一步研究肠癌的发生发展机制，为临床上治疗提供新的靶点。锌指蛋白是在哺乳动物细胞内含量第一的蛋白质模体，是多种特异性DNA结合蛋白质中最大的一个类别。这些锌指蛋白与真核基因的表达调控密切相关，它们是一类重要的调控因子，参与肿瘤的发生，发展，转移等诸多过程。而其中的RjNG指结构域是一种蛋白质相互作用区域，普遍有2方面功能：1，可参与基因转录调控、DNA

5、修复和重组、细胞转化及肿瘤抑制等多种生物过程；2，ⅪNG指结构域是E3泛素蛋白连接酶的重要活性区域，许多含有ⅪNG指结构域的蛋白在泛素途径中起关键作用。泛素化．蛋白酶体系统(ubiquitin．ProteasomeSystem，uPS)是真核细胞内重要的蛋白质质控系统，是细胞内ATP依赖的蛋白质选择性降解的主要途径，细胞内80％一90％的蛋白通过泛素一蛋白酶体途径降解。UPS参与调节炎症、细胞增生与分化、细胞内信号转导、细胞周期进程、转录调控、抗原剃呈、免疫应答、细胞凋亡和DNA修复等各种细胞学功能。当泛素蛋白酶体系统

6、识别特异性底物的基因序列发生功能性突变时，其对靶蛋白的调控能力可以引起癌蛋白聚集、抑癌蛋白异常降解、突变细胞凋亡受阻和增殖加速，导致肿瘤的发生。RNl81是一个新的C3H4型锌指蛋白，基因全长716个碱基，编码153个氨基酸的蛋白，这个蛋白还有一个对NG指结构域。2008年Brophy等人首次证实IⅢ181具有E3泛素连接酶的活性。而E3酶通过泛素多聚化，在蛋白酶体降解蛋白的底物特异性中起到决定性的作用，作为UPS的关键蛋白E3酶的异常，在疾病包括癌症的发生、发展中起到一个重要作用。本课题组的前期实验发现，I矾181可

7、以通过E酬APK途径抑制肝癌细胞HepG2、SMMC7721的生长。提示RNl8l能参与调节肝癌细胞的发生，发展过程。但是关于RNl8l对于别的肿瘤的生物学功能的研究非常少，尤其是对大肠癌的研究更是一片空白。硕士学位论文因此，本研究以我国多发的大肠癌为研究对象，通过分子生物学实验、免疫组织化学技术、细胞学实验、等现代常用实验技术，对I州181在大肠癌中生理功能及其作用机理进行研究。目的：l明确在临床结肠癌组织中I矾18l的表达情况及其与结肠癌发生发展的关系。2，明确在野生结肠癌细胞中RNl8l的表达。3，沉默IⅢ181

8、的重组结肠癌细胞系的构建。4，探索RNl8l在结肠癌细胞生长方面的具体生物学作用并研究其作用机制。方法：1，采用免疫组织化学染色的方法，分析在93例临床结肠腺癌组织中，lⅢ181的表达量与临床结肠癌发生、发展的关系。2，荧光定量RT．PCR与Westenlblot实验鉴定l斟181在野生型结肠癌细胞中本底表达量。3，将购买的I出1