大葱油对体内外人胃癌细胞生长的抑制作用

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1、大葱油对体内外人胃癌细胞生长的抑制作用作者：周晓娜,任锡玲,常丽丽,张静　【摘要】　　目的观察大葱葱白提取物大葱油对人胃癌MGC803细胞的体内外生长抑制作用。方法用MTT，裸鼠移植肿瘤重量测定,DNA指数和平均DNA质量及TUNEL法，观察大葱油对离体培养的MGC803胃癌细胞系和裸鼠皮下移植瘤生长的影响。结果大葱油24h、48h、72h的IC50分别为52μg/ml,38μg/ml,20μg/ml。肿瘤生长抑制率为36.07%。实验组肿瘤DNA指数和平均DNA质量下降。TUNEL测定显示，实验组细胞凋亡率为（15.23±

2、1.82）%，对照组为（2.77±0.62）%，差异有显著性。结论大葱油对体内外人胃癌细胞的生长具有抑制作用，其机制可能与其抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡有关。【关键词】大葱油　人胃癌细胞　生长　InVivoandinVitroEffectsofAlliumFistulosumLOilonGroanGastricCarcinomaCellsKeyangastriccarcinomacells;Grol,制成20mg/ml的吐温80溶液后，再加入大葱油0.4g,安瓿封存，100℃流通蒸气灭菌30min，贮存在避光处。1.2.

3、2大葱油的急性毒性实验[3]昆明种小鼠20只，雌雄各半，体重20～22克，10只为一组，共分二组，第一组腹腔注射大葱油0.5ml，第二组腹腔注射大葱油0.25ml，用药后观察一周未见小鼠死亡，遂行最大耐受量试验。仍取昆明种小鼠20只，雌雄各半，体重20～22g。禁食15h，不禁水，实验日给小鼠腹腔注射最大浓度（10mg/ml）和最大容积（1ml）大葱油，上、下午各一次。给药后常规饲养，观察7天，期间小鼠自由进食，7天后脱颈处死小鼠，解剖后观察心、肺、胃、肠、肝、脾等主要脏器有无异常。1.2.3细胞培养将MGC803细胞用R

4、MPI1640培养基培养，内含15%新生小牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素，置入37℃，5%CO2条件下的培养箱中，每日观察细胞生长情况。1.2.4大葱油对胃癌细胞增殖的影响（MTT法）[4]取对数生长期的MGC803细胞，以1×105/ml的浓度接种于96孔培养板，培养24h后分组，实验组大葱油的终浓度分别是100μg/ml、75μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml，同时设立相应浓度的溶剂（吐温80）为对照组。每组设3个复孔，加药后分别继续培养24h、48h、72h后，各加

5、入噻唑蓝，37℃作用4h，每孔加入400μl二甲基亚枫。用震荡器震荡10min，在全自动酶标仪上以波长490nm测定光密度值。按公式：肿瘤细胞生长抑制率（%）=（1实验组光密度值/对照组光密度值）×100%。求出大葱油第24h、第48h、第72h的半数杀伤浓度（IC50）。1.2.5人胃癌裸鼠移植瘤模型的建立选用对数生长期MGC803细胞用于实验，收集并调整细胞数为1×107/ml，在无菌条件下，裸鼠左腋皮下接种0.2ml，注射局部出现明显皮丘后,观察至出现结节，移植瘤模型建立。1.2.6动物分组及大葱油的用法10只裸鼠

6、的移植瘤生长至可触及时，分两组。两组间裸鼠体重分别为（18.59±1.37）g、（18.43±1.34）g，无显著性差异（P＞0.05）。实验组（5只）腹腔注射10mg/ml大葱油0.5ml/次,对照组（5只）腹腔注射20mg/ml吐温800.5ml/次,每天固定时间注射两次，连续32天。1.3移植瘤检测1.3.1抑瘤效果的观察①实验期动态观察肿瘤生长情况，每周用游标卡尺测量肿瘤最大长径（a）及最小短径（b），根据公式V=ab2/2，计算肿瘤体积（mm3）[5]。末次给药24h，实验结束，脱颈处死裸鼠，剥离肿瘤，测量瘤重，

7、根据公式计算肿瘤生长抑制率。公式：肿瘤生长抑制率（%）=对照组平均瘤重实验组平均瘤重/对照组平均瘤重×100%。②剥离的肿瘤用10%中性甲醛溶液固定，用于HE及Feulgen染色。1.3.2DNA图象分析DNA指数及平均DNA质量将Feulgen染色的切片在高倍镜下（10×40）观察，选择无重叠者为测试对象。每张切片随机取100个肿瘤细胞作为阳性细胞，以同一张切片中的40个淋巴细胞作为对照细胞，由图象分析仪分析其DNA指数及平均DNA质量。1.3.3TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡切片脱蜡、水化，胃蛋白酶消化，3%过氧化氢阻断

8、内源性过氧化物酶活性，加新配制的TdT酶，37℃孵育1h，终止液终止TdT酶反应，加抗地高辛过氧化物酶复合物室温孵育30min，二氨基联苯胺显色，甲基绿衬染，中性树胶封片，镜下观察。阳性对照：在TdT酶处理前用DNA酶预处理；阴性对照：不经TdT酶处理。结果判定：凋亡细胞的细胞核呈棕黄色，