复方参七汤对人结肠癌细胞株裸鼠肝转移影响

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1、复方参七汤对人结肠癌细胞株裸鼠肝转移影响作者：陈瑞新,徐青,于秀,陈玉泉,沈洪薰　[摘要]　　目的:建立人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型，研究复方参七汤对裸鼠肝转移模型的影响。方法:采用BALB/C裸鼠，Ls174t人大肠癌细胞株,脾脏切除脾脏种植法建立裸鼠肝转移模型。给予复方参七汤颗粒饲料喂养，观察体态及肿瘤生长情况；采用巢式逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测裸鼠循环血中CK20mRNA表达；标本作病理组织学检查。结果:①脾脏切除脾脏种植法建立裸鼠结肠癌肝转移模型的成功率为100%，病理组织学证实肝转移癌细

2、胞呈人结肠癌低分化腺癌特征；②实验组裸鼠肿瘤数目及重量明显低于对照组，P<0.05；③实验组裸鼠肝转移血中CK20mRNA表达为0.398±0.143,明显低于对照组0.518±0.090，P<0.05。结论:复方参七汤可显著降低肝转移裸鼠血中CK20mRNA表达，抑制裸鼠结肠癌肝转移的发生及发展，可作为大肠癌术后预防复发和肝转移治疗的手段之一。　　[关键词]　　结肠癌;肝转移;裸鼠;CK20mRNA;RT-PCR　　Abstract:ObjectiveToestablishthelivermet

3、astasesofcolonicadenocarcinomaforexperimentalstudyoftheeffectofpoundshenqitanginnudemice.MethodsNudemicelivermetastasismodelofcoloniccancerancoloniccancercellsline(Ls174t)inoculatedintomicespleen.Granularforageentalgroupandgranularforageiceandgroaensinedhis

4、tologically.CK20mRNAinbloodinnudemiceetastasisofcoloniccarcinomaetastasisodel.Thepathologicalresultsshoourcellsoflivermetastasesancolonicadenocarcinoma.Inexperimentalgroup,thetumornumberandtheetastasesiquantitativeexamination,inexperimentalgrouptherelativev

5、alueofCK20mRNAexpressioninblood(0.40±0.14)etastasiscarcinomaanddecreasethepositiveexpressionofCK20mRNAinexperimentalgroup,suggestingthatpoundshenqitangmaybeethepotentialtherapeuticstrategyforlivermetatstasisofcoloniccancer.　　Keya；Livermetastases；Nudemice；CK

6、20mRNA；RT-PCR　　大肠癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，目前仍以手术切除为首选方法，但由于术后局部复发和转移，其整体治疗水平仍不尽人意，术后5年生存率仍在50%~55%之间[1-2]。近年来，通过西医和中医药的综合治疗，患者的生存率有了明显提高[3]。本实验通过建立裸鼠肝转移模型，应用CK20mRNA表达等观察指标，研究中药复方参七汤对裸鼠结肠癌肝转移的防治作用，以期为临床应用提供理论依据。　　1　　材料和方法　　1.1　　中药复方参七汤沈洪薰教授的经验方[4-5]。由参三七、人参、黄芪、当归、陈皮、

7、木香、川草乌、半枝莲、半边莲、甘草、谷麦芽等组成。每帖中药煎成200ml，配制颗粒饲料。　　1.2　　Ls174t细胞悬液的制备人结肠腺癌Ls174t细胞株购于中科院上海细胞库。采用RPMI-1640完全培养基，置于37℃含5%CO2培养箱内，取对数生长期的细胞，用0.25%胰蛋白酶(含0.01%EDTA)消化，制成细胞悬液0.1ml,含细胞数1×106个，台盼蓝测定细胞活力在95%以上。　　1.3　　实验模型制备24只(4～6周龄)裸小鼠购于中科院上海实验动物中心，随机分为实验组和对照组（各12只）。经腹腔

8、注射1%戊巴比妥钠0.15ml～0.2ml(40mg・kg-1)麻醉，左肋缘下0.5cm处打开腹腔，用4号针将0.1ml细胞悬液缓慢注入脾脏下极的包膜下，注射点用75%酒精棉球压迫出血点，5min后将脾脏切除，腹壁全层缝合，置于SPF动物房中喂养。实验组每天喂以复方参七汤颗粒饲料（0.6ml/20g体重),对照组裸鼠喂以普通颗粒饲料。　　1.4　　观察指标　　1.4.1　　大体观察:密