hplc在清肺抑火丸中盐酸小檗碱含量测定中的应用研究

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1、HPLC在清肺抑火丸中盐酸小檗碱含量测定中的应用研究杨泰然1石亚囡21辽宁省营口市药品检验所1150002辽宁省大连市药品检验所116021【摘要1目的研究高效液相色谱法(HPLC)在清肺抑火丸中盐酸小檗碱含量测定中的应用。方法选用Diamonsil-C18为色谱柱，乙腈一0.05mOl·L-l磷酸二氢钾溶液(27:73)为流动相，对清肺抑火丸中盐酸小檗碱含量进行测定，流速为1.0ml·min-l，检测波长为345mm。结果盐酸小檗碱线性范围为9.1到130.5μg·ml-l之间，平均回收率为99.89

2、%,RSD=0.28%(n=6)o结论使用高效液相色谱法(HPLC)测定清肺抑火丸中盐酸小檗碱含量科学有效、回收率高。【关键词1HPLC；清肺抑火丸；盐酸小檗碱含量清肺抑火丸主要由黄柏、栀子、黄等、浙W母、苦参、知母等十味中药制成。主要用于治疗痰热阻滞而引起的口干舌燥、咽喉肿痛、咳嗽、痰液粘稠色黄、便秘等症状［。盐酸小檗碱是该药的有效成分，異有清热解毒的功效，但是目前还没有文献报道使用HPLC测定该药物中盐酸小檗碱的含量［1］。木文应用高效液相色谱法测定清肺抑火丸中盐酸小檗碱含量，以丰富该产品的质量控制内容。1.资料仪器与试药1.1仪器高效液相色谱仪

3、，型号：e2695,检测器：2489型紫外检测器；生产公司：美国Waters。色谱柱：Diamonsil-C18柱。1.2试药选用乙腈和甲醇为色谱纯，水为重蒸水，磷酸二氢钠、十二烷基硫酸钠、磷酸等为分析纯。盐酸小檗碱对照品(上海瑞齐生物科技有限公司制造，批号20150408)，清肺抑火片(吉林修正药业集团股份有限公司生产，国药准字Z22025033）。2.方法与结果2.1色谱条件Diamonsil-C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）；流动相为乙腈一0.05mol·L-l磷酸二氢钾溶液（27:73）,流速为1

4、.Oml·min-1；检测波长为345m,色谱柱温为室温。2.2供试品溶剂将清肺抑火丸研磨成粉末，精密称量2g放入100ml容量瓶当中，加入100ml盐酸-甲醇溶液（1%）,采用超声处理30分钟，冷置后补足盐酸-甲醇溶液，摇晃均匀，选用0.45μm的微孔滤膜对溶剂进行过滤，过滤后所得即为供试品溶剂。2.3对照品溶剂精密称量适量的盐酸小檗碱对照品，同样加入100ml盐酸-甲醇溶液（1%）溶解，进行超声处理、摇匀，最终制成对照品溶剂。2.4阴性对照溶液选取清肺抑火丸中不含黄柏以外的其他成分制成阴性对照溶液，苏制作方法与供试品溶液制作方

5、法相同。2.5线性关系研究精细量取9.1、18.2、36.4、72.8、145.6μg·ml-l的对照品溶液各20μl,按照上述色谱条件层顶峰面积，以峰面积值（A）为纵坐标，以盐酸小檗碱浓度（C）为横坐标进行线性冋归，最终获得线性方程A=70798C+35454,r=0.9997（n=5）。线性冋归方程表明盐酸小檗碱在9.1和130.5μg·ml-l范围之间吋峰面积值（A）与盐酸小檗碱浓度（C）有较好的线性相关性。2.6精密度测验精密量取20μl的供试品溶液，连续量取5次，结果显示：每次峰面面积值都

6、为644.4,RSD为0.91%,测验证明仪器精密度良好。2.7穂定性测验在0吋、2吋、4吋、6吋、8吋、12时分别取供试品溶液20μl，结果发现12小吋内盐酸小檗碱峰面积平均值为613.9，RSD为2.32%，这表明供试品溶液在12小时内的稳定性良好。2.8重复试验按照2.2供试品溶剂的制备方法制备6份，对其分别进行测定，最终得到清肺抑火丸中盐酸小檗碱的含量约为2.637mg·g_l,RSD为1.42%(n=6),实验结果表明本测定方法重复性良好。2.9加样冋收测验选取同批清肺抑火丸样品共6份，加入一定量的盐酸小檗碱对照品，按照

7、2.2供试品溶剂的制备方法制备溶剂并进行测定，统计冋收率，统计结果显示样品冋收率的平均值为99.89%,RSD的平均值为0.28%。数据显示该测定方法具奋良好的冋收率。具体情况如表1.表1.冋收率测验结果2.10样品测定选取3批清肺抑火丸按照2.2与2.3供试品溶剂、对照品溶剂的制备方法制备溶剂，分别吸取两种溶剂各10μl注入HPLC仪器当中，测定得出清肺抑火丸中盐酸小檗碱的质量分别为2.233,2.047,2.632mg·g—l。1.讨论清肺抑火丸主要由盐酸小檗碱发挥药效，盐酸小檗碱广泛存在于各种植物当中，清肺抑火丸中的盐酸小檗

8、碱的成分测定多采用薄层扫描法和HPLC法进行测定［2】。关于薄层扫描法测定清肺抑火丸中的盐酸小檗碱的方法早有