实验五-放线菌形态观察

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1、放线菌形态的观察放线菌形态的观察目的要求实验材料实验程序思考题目的要求学习观察放线菌的基本方法加深理解放线菌的形态特征实验材料放线菌培养物：费氏链霉菌（Streptomycesfradiae）或“5406”产生菌（St.microflacus）细黄链霉菌四天培养物。显微镜、载玻片、接种环、解剖针、解剖刀、酒精灯、镊子等。酒精、蒸馏水等。G＋GC含量高（和另一类阳性菌——厚壁菌门相比）好氧、少部分寄生兼性厌氧放线菌重要的属有：放线菌属(Actinomyces)节杆菌属(Arthrobacter)棒杆菌属(Corynebac

2、terium)弗兰克氏菌属(Frankia)微球菌属(Micrococcus)微单孢菌属(Micromonospora)分枝杆菌属(Mycobacterium)诺卡氏菌属(Nocardia)丙酸杆菌属(Propionibacterium)链霉菌属(Streptomyces)(1)链霉菌属（Streptomyces）分枝菌丝孢子体或气生菌丝菌丝无横隔好氧原核生物降解高分子底物生长条件简单抗生素(2)棒状杆菌属（Corynrbacterium）谷氨酸棒杆菌（C.glutamicum）味精生产菌氨基酸生物合成调节机制白喉棒状杆

3、菌（C.diphtheriae）(3)分枝杆菌属(Mycobacterium)不规则杆状菌抗酸性染色细胞壁含有大量的脂类和分枝菌酸结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌抗生素链霉素灰色链霉菌（Streptomycesgriseus）四环素红霉素新霉素庆大霉素FilamentousActinomycetesTypicalappearanceofastreptomycetegrowingonagarslantsThecolorsareduetotheproductionofpigmentsFilamentousActinomycetes

4、AntibioticactionofsoilmicroorganismsonacrowdedplatestreptomycetesBacillus插片法1.倒平板2.接种：划线培养3.插片：无菌操作将盖玻片以大约45度角插入培养基4.培养倒置培养28℃，通常4－6天5.镜检插片法28℃插片培养4-6d，轻轻取出盖玻片，直接观察镜检。观察菌丝和孢子丝自然生长的性状，其中包括气生菌丝（较粗）、基内菌丝（较细）和孢子丝的形状，如分枝状况及孢子丝的卷曲等，并绘图说明（本实验采用费氏轮生菌接种后观察）。首先寻找插在培养基的界面分界

5、线，观察营养菌丝、气生菌丝形态及分枝情况。调节亮度直接镜检FilamentousActinomycetesStagesintheconversionofastreptomycete’s(链霉菌)aerialhyphaintospores(conidia)Varioustypesofspore-bearingstructuresinthestreptomycetesFilamentousActinomycetesSeveralspore-bearingstructuresofactinomycetes:Streptomyc

6、es浸染法放线菌形态观察插片培养(高氏1号培养基)，取片浸染：把盖玻片上长有放线菌的部分，放入石碳酸复红染液池中浸染0.5-1min染色液：A液：碱性复红0.3g,95%乙醇10ml；B液：石碳酸5.0g,蒸馏水95ml。染色时，混合A液及B液，再将混合液稀释5倍即成。干燥：染色完毕，用吸水纸吸掉盖玻片上多余的染液，将盖玻片放于酒精灯火焰上部烘干，注意温度不宜高，以免盖玻片碎裂。镜检：取一洁净载玻片，滴入适量蒸馏水，用镊子将干燥好的盖玻片放在滴有蒸馏水的地方，有菌的一面朝上，操作中尽量避免气泡的产生。盖玻片紧紧地贴附在载

7、玻片上后，切勿随意移动，随即进行显微观察。插片法放线菌菌丝（40×）插片法浸染法菌丝（40×）插片法浸染法放线菌孢子（100×）插片法浸染法放线菌孢子（100×）印片染色法1.接种培养28℃培养4－7d2.印片：用镊子取一小块菌苔，置于载玻片上，取另外一洁净玻片盖在菌苔上，轻轻粘一下菌苔表面，使培养物（气丝、孢子丝、孢子）粘附载玻片中央，过火焰2－3次固定3.染色：石炭酸复红染色1min，水洗4.镜检（油镜）.印片法放线菌孢子（100×）印片法放线菌菌丝（100×）印片法放线菌孢子（100×）浸染法放线菌形态观察取片－石

8、碳酸复红浸染0.5-1min－干燥：注意温度不宜高－镜检：滴入适量蒸馏水，将盖玻片放在滴有蒸馏水的地方，有菌的一面朝上，显微观察。载玻片－印片－固定－石炭酸复红染色1min－水洗－晾干－油镜5406菌孢子丝的形状，如分枝状况及孢子丝的卷曲等，并绘图说明。印片染色法思考题在用插片法观察气生菌丝和孢子丝的形态时，要注意些